Invitrogen GeneArt Strings DNA Fragments 是定制的、非克隆的、由寡核苷酸合成、组装的双链线性DNA片段。它们是使用我们的GeneArt Gibson Assembly® 克隆试剂盒进行多片段组装的理想选择，错误率低。
可以在不增加成本的情况下对所有 Strings DNA 片段进行蛋白表达优化，也可作为 Strings DNA文库。
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新的 GeneArt 服务订购中心使订购变得简单
- 可配置项目参数、跟踪订单状态，可在同一平台获得各类支持
- 以最小的改动轻松修复复杂的序列
- 可进行全面优化以提高蛋白表达
- Strings DNA片段免费运输
为了简化订购，GeneArt Strings 助手工具和经典门户中的Strings服务将于2022年11月底停用。项目草案在2022年11月30日之前必须在这些工具中提交，在此日期之后，在 Strings 助手工具中直接访问历史项目将受到限制。
了解更多有关 Strings 助手工具停用的常见问题解答。
选择 Strings DNA Fragments 的原因
Strings DNA片段由寡核苷酸合成、组装，使用的是为GeneArt 基因合成克隆开发的相同的高质量工艺，交付时已经干燥，可用于重悬、克隆和筛选以鉴定正确的序列。它们以管状形式交付，是让您的合成基因克隆到您的表达质粒中的一个快速而明智的选择。
与野生型序列相比，专有的 Invitrogen GeneOptimizer 算法在下游蛋白表达方面有明显的产量，而且无需移除额外的接头。
Strings DNA 片段：
- 经济——GeneArt Strings DNA 片段是您进行自己的PCR或完全克隆基因研究的一种高性价比的选择
- 灵活——完整的基因设计和克隆的灵活性；可选择任何下游方法进行克隆
- 快速——可在3-4个工作日内产出至少 200ng 的 GeneArt Strings DNA 片段
- 优化——GeneArt GeneOptimizer软件提升下游蛋白表达的产量
第一次使用 GeneArt 服务？查看GeneArt订购中心快速指南
| 片段范围（bp） | 生产时间（工作日）* |
|---|---|
| 200 – 2,000 | 5 |
| 2001 – 3000 | 8 |
| DNA 文库：IUPAC 混合碱基 | 10-15 |
*生产时间是指在我们的生产设施中合成 GeneArt Strings DNA 产品所需的工作日。 交付时间是生产时间之外的时间，取决于货物的目的地。
使用 DNA Strings：应用数据
GeneArt Gibson Assembly 克隆试剂盒
使用 GeneArt Gibson Assembly HiFi 克隆试剂盒在 pcDNA 3.4 载体中使用 Invitrogen TOP10 感受态细胞组装了一个、二个、三个的1 kb的 Strings DNA 片段。
GeneArt Gibson Assembly HiFi 试剂盒无论针对单片段还是多片段均可提供高克隆效率。
限制性内切酶克隆实例
对 8 个长至 3000 bp 的 Strings DNA 片段使用 5’ AscI 限制性内切酶和 3’ PacI 限制性内切酶进行克隆。在连接和转化后，划平板并在37°C孵育过夜。挑取8个 (<1 kb) 或16个 (>1 kb)单 克隆，并进行菌落PCR鉴定，以确定全长克隆；对4至8个全长克隆进行测序，以确定序列正确的克隆数。
经菌落PCR鉴定得到的正确长度的克隆比例（克隆效率）和基于全长克隆数量的正确序列的克隆比例（保真度）。
GeneArt IIs 型组装实例
8个长至2800 bp并带有合适序列末端（AarI 识别序列和6 bp保护碱基）的Strings DNA片段用于与GeneArt IIs 型组装试剂盒 Aar I 直接组装。得到的4个基因长度分别为5056 bp、5061 bp、5267 bp和5448 bp。在连接和转化后，划平板并在37°C孵育过夜。挑取16个克隆进行菌落PCR鉴定，以确定全长克隆。对所有4个组装基因都选取了8个克隆进行测序以确定序列正确的克隆数。
基于全长克隆数量的序列正确的克隆比例（保真度）和经菌落PCR鉴定得到的长度正确的克隆比例（克隆效率）。
GeneArt 无缝克隆实例
10 个长至 3000 bp 的 Strings DNA 片段使用GeneArt 无缝克隆和组装试剂盒进行克隆。在连接和转化后，铺板并在 37°C 孵育过夜。挑取 8个 (<1 kb) 或 16 个 (>1 kb) 克隆，并进行菌落 PCR 鉴定，以确定全长克隆；对 4 至 8 个全长克隆进行测序，以确定序列正确的克隆数。
基于全长克隆数量的序列正确的克隆比例（保真度）和经菌落PCR鉴定得到的长度正确的克隆比例（克隆效率）。
Strings DNA 片段的长度可达 3000 bp，而 GeneArt 无缝组装技术可用于直接组装两个长达 1 kb 的 Strings DNA 片段。
如果您想使用无缝组装技术组装更多的 Strings DNA 片段或更长的 Strings DNA 片段，建议先进行亚克隆以减少组装后的筛选工作，以找到正确的克隆。此外，您可以使用 GeneArt IIs 型组装技术。
用GeneArt 无缝克隆和组装试剂盒对12个长至 1 kb 并带有合适序列末端（15 bp 与载体或相邻片段重叠的序列）的 Strings DNA 片段直接组装。得到6个长度分别为 1375 bp、1466 bp、1536 bp、1590 bp、1647 bp 和 1853 bp的基因。在连接和转化后，平板划线并在 37°C孵育过夜，挑取16个克隆进行菌落PCR鉴定，以确定全长克隆。对所有6个组装基因都选取了6个克隆进行测序以确定序列正确的克隆数。
GeneArt Strings DNA 片段 Gateway 克隆实例
将5 个长至 1000 bp 并带有 attB 位点的 Strings DNA 片段，克隆进入 pDONR 221。在连接和转化后，平板划线并在37°C孵育过夜。挑取8个克隆，并进行菌落PCR鉴定，以确定全长克隆；对4至7个全长克隆进行测序，以确定序列正确的克隆数。
基于全长克隆数量的序列正确的克隆比例（保真度）和经菌落PCR鉴定得到的长度正确的克隆比例（克隆效率）。
克隆和序列设计建议
Strings DNA产品可以使用任何适用的克隆方法进行克隆，前提是在设计中包括适当的末端。末端序列可以在将序列上传到GeneArt服务订购中心之前添加，也可以在导入后添加。
| 克隆方法 | 推荐的序列设计 |
|---|---|
| 限制性内切酶克隆 | 添加所需的5′和3′限制性内切酶序列，加上两端的核苷酸以确保酶的有效结合。 |
| GeneArt IIs型组装 | 添加所需的5′和3′限制性内切酶序列，加上两端的核苷酸以确保酶的有效结合。 |
| GeneArt 无缝克隆和组装 | 加入15bp（或更长，取决于使用试剂盒）与载体或相邻序列重叠的序列 |
| Invitrogen Gateway 克隆 | 加入attB位点以便重组进入pDONR™载体 |
| Invitrogen Zero Blunt TOPO PCR 克隆 | Strings片段是平末端的，因此建议加入5–10bp的保护碱基以补偿小的末端缺口 |
| TA和Invitrogen TOPO TA 克隆 | Strings 片段是平末端，需要在dATP存在下使用Taq聚合酶在末端加 A |
筛选的建议
Strings DNA 片段是组装的寡核苷酸的PCR扩增子，可直接用于筛选，以鉴定出正确克隆。Strings DNA 片段经过整体序列质控流程，以帮助确保您所需的片段存在于产物中。
为了在>鉴定正确的克隆，我们建议使用以下筛选指南。
| Strings片段长度 | 筛选建议 |
|---|---|
| 长达 1 kb | 测序2到4个全长克隆 |
| 1-2 kb | 测序3到5个全长克隆 |
| 2-3 kb | 测序4到8个全长克隆 |
GeneArt Strings DNA片段是使用和 GeneArt 高质量基因合成相同的工艺从合成核苷酸组装而成的可定制非克隆双链线性DNA片段，长度从200bp至3000bp。Strings片段是将合成基因克隆进表达载体的一种快速方便的方法。我们在3-5 (不超过1000 bp) 或8 (1000 至 3000 bp) 个工作日内可合成至少200 ng的 Strings DNA 片段。GeneArt Strings DNA可以在线设计、优化和订购，是克隆您的表达质粒的一种高性价比的明智选择。
我们过去曾经提供100 – 199 bp的 Strings DN 片段，但现在不再提供了。
Strings 片段是寡核苷酸合成、组装的扩增子；是基因合成过程的一种中间产物。该过程会生成一个片段库，因此需要进行克隆和筛选以获得正确克隆。Strings DNA 片段在发货前，经过大量的序列测序，以确保您所需的片段存在于片段库中。
Strings DNA 产品作为干粉提供，可直接重悬用于克隆。我们建议您开管之前进行离心，向管底加入适量的水并室温孵育至少1小时（或4°C孵育过夜）。孵育后，小心重悬产品并立即使用。如需长期储存，请重悬并分装冻存于–20°C温度下。请避免反复冻融。
不一样。200至1000 bp 的 Strings DNA 片段的生产需要5个工作日，而1000至3000 bp的Strings DNA片段的生产则需要8个工作日。根据序列本身的性质，生产时间可能不同。
是的。因为您需要自己进行克隆以获得最终基因，所以Strings DNA 片段的价格总是比基因合成便宜。
有的。我们建议使用 GeneArt 网上订购平台进行订购，您可以使用免费基因编辑和优化功能。在编辑和优化后，请检查最终片段序列以确保这是您实验室进一步处理所需要的序列（例如，克隆所需的片段或限制位点和缓冲基的潜在同源重叠）。
不提供，Strings DNA 片段没有亚克隆和组装服务，因为它旨在为您提供最快速最经济的获得基因的方式。如果您不想自己克隆基因，我们推荐您使用全基因合成服务。
是的，您可以直接组装两个 Strings 片段而无需亚克隆。赛默飞提供多种无缝组装技术，如 GeneArt IIs 型组装和 GeneArt 无缝克隆和组装技术。请参考本页中应用实例部分以获取更多信息。根据序列的长度和片段的数量，筛选难度可能会很大。因此我们通常建议进行亚克隆以降低组装后的筛选难度。
不是。Strings DNA 片段的长度限于200至3000 bp。如果您的序列更长，那么您需要使用基因合成或从两个或更多 Strings DNA 片段进行组装。此外，Strings DNA 片段的生产过程进行了简化以确保快速便宜地为您提供产品。如果您的序列很复杂，那么您可能受到提示告知您的序列由于复杂度高而不能作为 Strings DNA 片段合成。在这种情况下，我们建议您修改您的序列以满足生产要求（标准见下文）或以基因合成的方式订购您的基因。在很多情况下，使用订购平台的基因优化功能可以使您的序列满足 Strings 片段生产要求。如果仍然不满足生产要求，您可以手动对序列进行编辑。
重要的生产标准有：
- GC含量为20%至80%（在峰位置，不是指全部）
- 无长的二级结构或序列重复
- 无>25 bp的 A/T 延伸或>20 bp的G/C延伸
Gibson Assembly® 是 SGI-DNA, Inc. 的注册商标，已得到授权和许可。
NEBuilder®是New England Biolabs, Inc. 的注册商标。
In-Fusion®是Takara Bio USA, Inc.的注册商标。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。