Thermo Scientific SuperSignal West Dura 持久型化学发光底物经过优化，可实现高灵敏度和长信号持续时间的检测，非常适用于基于冷 CCD 镜头的成像系统。与信号在 30-60 分钟之内下降到几乎无法检测到的底物不同，SuperSignal West Dura 化学发光底物产生的信号可稳定保持 24 小时，从而实现胶片或成像系统的多次曝光。
SuperSignal West Dura 底物的信号持续时间更长。 在硝酸纤维素膜上检测 HeLa 细胞裂解物中的 Hsp86。在样品缓冲液中稀释 HeLa 细胞裂解物，然后在 95˚C 下加热 5 分钟。泳道 1 含有 10μg 总蛋白（总 10μL/孔）。制备四组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔（泳道 2-5）。蛋白转印到硝酸纤维素膜上后（货号88024），进行印迹封闭（货号37542），用兔抗 Hsp 86 抗体（货号PA3-013）孵育，然后用山羊抗兔 IgG HRP 二抗（货号31460）孵育，二抗浓度为 6.6 ng/mL。最后，根据产品说明书分别加入 SuperSignal West Dura 底物（货号 34076）或 Amersham™ ECL™ Prime 底物（GE Healthcare，货号RPN2232）。在底物孵育后的各个时间点，使用 CCD 成像系统对两个印迹进行成像。（在每个时间点对两个印迹使用相同的成像曝光参数。）
使用 SuperSignal West Dura 底物实现中飞克检测。 在电泳还原样品缓冲液中稀释 Turbo GFP-His-HA-FLAG。 泳道 1 包括 1,000 fg 的 Turbo GFP。制备七组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔。电泳后，将蛋白质转印到 PVDF 膜（货号88518）上，然后使用 SuperBlock T20（TBS）封闭缓冲液（货号37536）封闭膜。膜与生物素化的 His 抗体 （货号MA1-21315-BTIN）一起孵育，一抗浓度为 1 μg/mL ，然后与 Invitrogen Streptavidin, HRP 二抗（货号21126）一起孵育，二抗稀释度为1：50,000。加入 SuperSignal West Dura 底物（货号34076）后检测印迹。
使用 SuperSignal West Dura 底物获得更高的灵敏度和更长的信号持续时间。 在电泳还原样品缓冲液中稀释 A431 细胞裂解液。泳道 1 包含 5 µg 的 A431 裂解液。制备五组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号84731）。使用含 5％ 牛奶的 TBST 缓冲液封闭膜。将膜与 β-Catenin 抗体（货号MA1-300) 一起孵育, 一抗浓度为 0.3 µg/mL，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号32430）一起孵育，二抗浓度为20 ng/mL。根据每个制造商的说明书，加入 SuperSignal West Dura 底物（货号34076），Clarity™ Western ECL 印迹底物（Bio-Rad Laboratories, Inc.）或 Immobilon™ Western Chemiluminescent HRP 底物（EMD Millipore Corp.）后检测印迹。在 myECL 成像仪上同时采集 30 秒曝光的印迹结果，成像仪设置为：黑色= 65,296，白色= 65,535，gamma = 1.0。
