寡核苷酸拼接
GeneArt 高阶遗传组装系统独特的寡核苷酸拼接功能使用短的合成接头桥接现有 DNA 片段的末端，从而无需 PCR 即可精确组装没有末端同源性的不相关 DNA 片段。
图 1： 在pYES1L 载体中克隆 2个 DNA 片段。
在前两个示例中（图 1），显示了使用 pYES1L 作为载体的两个不同寡核苷酸拼接实验的克隆效率。该流程还可用于将缺失、插入或其他所需的修饰引入最终组装的重组 DNA 分子中。
工作原理
GeneArt 高阶和遗传组装系统依赖于酵母高效吸收和重组 DNA 片段的能力。该过程称为转化相关重组，可显著减少对 DNA 的处理，消除限制性酶切和连接酶连接，同时允许精确组装 DNA 片段。
GeneArt 无缝克隆和组装试剂盒与 GeneArt Strings™ DNA 片段配合使用效果更佳。这项新服务可提供高达 1,000 bp 用于克隆和组装的定制 DNA 片段，并且仅需 5-7 个工作日即可交付。
图 2 该系统可用于组装三个 DNA 片段，其中一个片段与线性克隆载体具有末端同源性。使用拼接寡核苷酸组装剩余片段。
在验证了包含最终组装构建体的“阳性”菌落后，将构建体转移到大肠杆菌中以用于下游应用中的大规模质粒制备。
高阶 DNA 组装实验流程
- 组装线性克隆载体（pYES1L 或你自己的 酵母调控载体）和你计划在离心管中组装的 DNA 片段。如果要组装非同源 DNA 片段，还应在同一离心管中加入拼接寡核苷酸。
我们强烈推荐使用基于网络的工具来确定相邻 DNA 片段之间的末端同源性，检查片段中可能导致预期外重组的潜在同源区域，和/或设计 PCR 引物和拼接寡核苷酸。 - 将线性克隆载体和 DNA 片段共转化进MaV203 感受态酵母细胞（系统随附）。将转化的酵母细胞接种到 CSM-Trp 琼脂平板上，孵育 3 天。
- 进行酵母菌落 PCR，以筛选出包含重组 DNA 分子的阳性酵母菌落。分离一个或多个阳性菌落，将组装的 DNA 分子转移到大肠杆菌中。
- 用系统中包含的专有缓冲液和珠子裂解阳性酵母菌落，并通过裂解物将组装的 DNA 分子转化进 One Shot TOP10 Electrocomp™ 大肠杆菌（系统随附）以用于下游应用中的大规模质粒制备。
无与伦比的精度和效率
GeneArt 高阶遗传组装系统的高克隆效率适用于各种片段大小和数量范围，并能够精确地无缝组装 DNA 片段，而无冗余序列。
图 3： 通过 PCR 扩增不同数量的 10 kbp 片段的克隆效率。
图 3 显示了分别组装10kbp的1、3 和 10 个DNA 片段的高克隆效率，这些片段通过 Platinum PCR SuperMix High Fidelity 扩增并克隆到 pYES1L 中。将构建体转移到大肠杆菌中，并对 DNA 连接点进行测序以确保准确性。
图 4： GeneArt 无缝克隆和组装试剂盒与 GeneArt 高阶遗传组装系统的克隆效率比较。
当在 pYES1L 中组装 10 个 5kb 片段时，克隆效率超过 90％。使用 Platinum PCR SuperMix High Fidelity 扩增片段，并使用 GeneArt 高阶遗传组装系统将其组装进 pYES1L，克隆效率超过 90％。
DNA Oligo Designer 是一个基于网络的直观工具，可以在您设计所需的 DNA 分子时为您提供指导。该工具可最大程度地节省时间，识别潜在设计陷阱并进行计算机克隆。DNA Oligo Designer 还提供了最终组装分子的图形显示，以及与 Vector NTI Advance 和其他用于分子生物学实验流程软件兼容的可下载 GenBank 文件。
DNA Oligo Designer 还可将您所需的 DNA 寡核苷酸直接发送到您的购物车，以便在具有此功能的国家/地区用户轻松订购。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。