膜联蛋白V染色

我们与 Nexins Research Bv（荧光磷脂酰丝氨酸结合蛋白原开发商）合作，致力于提供高亮度的膜联蛋白V偶联物，包括Annexin V-Alexa Fluor ，Annexin V-FITC、Annexin V-eFluor 等。这些膜联蛋白V偶联物为研究凋亡中间阶段的指标——磷脂酰丝氨酸外翻提供了快速可靠的检测方法。经我们的荧光膜联蛋白V偶联物染色后，凋亡细胞和未凋亡细胞显示出不同的荧光强度，流式细胞分析它们的差异通常约为 100 倍。

我们的膜联蛋白V偶联物的优势包括：

• 可与 Invitrogen Alexa Fluor 和 eFluor 染料偶联获得更明亮的信号
• 可以偶联目前所有激光器激发的染料
• 可选择单独型试剂或简单易用型试剂盒

只有活细胞和组织才能检测凋亡细胞的膜联蛋白V。如果样品染色后被固定，则需要特定的条件来保留信号。包括使用不含酒精的乙醛固定方法、使用含Ca²⁺但不含表面活性剂/洗涤剂的缓冲液。为了您的方便，我们还提供了浓缩膜联蛋白结合缓冲液，便于更好的检测膜联蛋白V与磷脂酰丝氨酸的结合。

避免假阳性

应该注意的是，当用膜联蛋白V偶联物染色时，会存在假阳性。坏死细胞的质膜受损，膜联蛋白V蛋白由此能进入到细胞内部与合内小叶中的PS结合。我们建议将活细胞非渗透染料与膜联蛋白 V 偶联物配套使用。这样就可以区分坏死细胞和凋亡细胞。然双阳性的细胞可能是晚期凋亡的细胞，但也可能是膜联蛋白 V 染色结合内部小叶的 PS ，因此不能完全认为是凋亡的细胞。在这种情况下，只有膜联蛋白V单阳性的细胞，被认为是具有完整的质膜，也就是凋亡的细胞。我们提供一系列试剂盒，包括膜联蛋白V偶联物和兼容的活细胞非渗透性染色（参见选择指南）。这些试剂盒适用于流式细胞分析。

使用代谢活性/膜联蛋白V/坏死细胞凋亡试剂盒对Jurkat细胞进行流式细胞分析。先用10 μM喜树碱或2 mM过氧化氢处理Jurkat细胞（人T淋巴细胞白血病细胞），孵育条件为37°C、5% CO₂，时间为4小时。接着分别用这些试剂盒处理并进行流式细胞术分析。（A）SYTOX Green荧光和APC Annexin荧光的散点图中，分别显示了活细胞、凋亡细胞以及坏死细胞。这些细胞群的代谢活性可以通过图B和图C进行评估。图（B）是十二烷基试卤灵荧光和SYTOX Green荧光的散点图，图（C）是十二烷基试卤灵荧光和APC荧光的散点图。

引用文献

1. Demchenko AP (2013) Cytotechnology 65:157–172.
2. van Engeland M, Nieland LJ, Ramaekers FC et al.(1998) Cytometry 31:1-9.