用小規模地分離特定蛋白質(例如免疫沉澱法, IP)或蛋白質複合體（例如免疫共沉澱, co-IP)時，使用Dynabeads和Pierce磁珠可獲得高結合力/產率、高再現性、高純度和低成本的最佳平衡。
根據全球論文發表趨勢，用Dynabeads磁珠進行免疫沉澱持續為成長最快速的實驗方法。
抗體與磁珠結合。Dynabeads和Pierce磁珠預先包被protein A、protein G、抗小鼠IgG或抗兔IgG抗體，由於快速動力學，加入的抗體僅需反應10分鐘即可與磁珠結合。生物素化抗體(biotinylated antibody)也可與鏈黴親和素偶聯(streptavidin-coupled)的Dynabeads和Pierce磁珠結合使用。在磁座上對磁珠進行一次性清洗，以去除未結合的抗體。
將樣品添加到磁珠中。將含有蛋白質的樣品加入已經洗滌後並帶有結合抗體的磁珠中，靜待反應10分鐘以結合感興趣的目標蛋白質。
如果是低豐度或低親和力的蛋白質，反應時間可增至1小時或放隔夜；但通常10分鐘的反應時間已足夠。
清洗結合蛋白質的磁珠。為維持結合目標蛋白質的高純度，在磁座上用緩衝液清洗磁珠2至4次，以去除所有未結合的蛋白質。此高效分離過程確保了高訊噪比。
洗脫蛋白質。如有需求，可透過溫和的洗脫程序或變性洗脫程序將蛋白質從磁珠上沖洗下來(詳見下列的洗脫說明)。
在您的免疫沉澱實驗使用Thermo Scientific磁珠。用磁珠進行免疫沉澱過程的動圖。
磁珠上的重組protein A和/或protein G因不含白蛋白(albumin)的結合位點，所以避免因共同純化而造成的污染。抗體與磁珠在溶液中結合是一種平衡反應。為了盡量獲取較多抗體，應保持少量反應體積以維持高濃度的磁珠和抗體。無須預處理樣品(即使是黏稠樣品)，因此不需對樣品或磁珠進行稀釋。如果擔心樣品中抗體濃度非常低，可以增加磁珠的使用量。
使用Thermo Scientific Pierce Crosslink Magnetic IP/Co-IP試劑盒，是從磁珠上洗脫抗體的另一選擇。
為了防止發生共洗脫，可以在免疫沉澱之前將抗體與磁珠上的protein A/G交叉聯結。
這一步驟對於若要在SDS-PAGE後續進行自動放射顯影術或Western Bloggint是非必要的，而對於銀染或考馬斯亮藍染色(coomassie dye)時則為選擇性步驟。
後續實驗將會影響您要挑選的已結合抗體產品。
已結合抗體的產品是最常用的方法，您的目標抗體與磁珠將直接結合、或與磁珠表面上預包被的配體(ligand)間接結合。
| Protein A, G, A/G | Secondary antibodies (anti-mouse, anti-rabbit) | Surface-activated beads | |
|---|---|---|---|
| Products | Beads only:Kits: | Beads only: | Beads only:Kits: |
| Binding properties | Non-covalent antibody binding | Non-covalent antibody binding | Covalent antibody binding |
| Antibody co-eluted off the beads | Yes† | Yes† | No |
| Type of ligand | Different ligands bind different species and antibody subclasses with different specificity‡ | Anti-mouse binds mouse IgG1, IgG2a, IgG2b; anti-rabbit binds all rabbit IgGs | All antibodies |
| Mass spec compatible | Yes (Pierce MS-Compatible Magnetic IP Kit, protein A/G) Not validated (Protein A, G) | No | Yes |
| Nonspecific binding | Low | Low | Ultra-low |
* 表面活化Dynabeads磁珠－適用於結合和捕獲更多標靶，查看更多Dynabeads相關產品。
† 交叉聯結(Crosslinking)可以避免抗體的共洗脫，但會降低目標抗原的產量。
‡ 了解哪一個已結合抗體的蛋白質是您免疫沉澱抗體的最佳選擇。
為提高靈活性，我們提供四種和鏈黴親和素(streptavidin)偶聯的 Dynabeads磁珠。請於Dynabeads鏈黴親和素選擇指南中查閱不同的特性。
在過去的25年中，鏈黴親和素偶聯的Dynabeads與生物素(biotin)化配體相結合，廣泛存在多種手動和自動化應用，論文引用已破數千次。鏈黴親和素偶聯的Dynabeads最廣泛應用領域是在核酸純化及次世代定序(NGS)等工作流程，然而其亦可用於免疫沉澱實驗(IP)。
適用重組蛋白表達的熱門融合標籤包括：
His和GST並非真正的表位標籤，因為其通常不是透過特異性抗體進行純化或檢測。相較之下，HA和c-Myc標籤是真正的表位標籤，因為它們只能透過特異性抗體進行純化或檢測。表位標籤很少用於批量純化，但經常用於免疫沉澱或免疫共沉澱。然而，以上四種標籤系統均可用於純化或pull-down技術應用。
Dynabeads在免疫沉澱(IP)性能持續超越其他方法或磁珠解決方案。還在使用Sepharose或瓊脂糖珠漿(agarose bead slurry)嗎?查看關於免疫沉澱的常見迷思。
圖1. Dynabeads磁珠具有更短的操作時間和更高的產量。根據製造商的操作手冊，採取與抗體及細胞裂解物等量的樣品材料進行免疫沉澱實驗。
結果顯示使用Dynabeads方法，所有磁珠表面的抗體均能有效地與抗原結合，並獲得最佳且高再現性的結果。
圖2. 您選擇的磁珠將影響結果。Dynabeads磁珠的表面清晰可完成有效結合，且不會有內層捕獲不想要蛋白質的狀況。(A) Dynabeads產品用的是一致性最佳、單顆、超順磁性的磁珠，生產品質嚴格管控以達高再現性。(B－D) 顯示其他供應商的磁性顆粒形狀和尺寸不一且容易捕獲雜質，導致較低的再現性並增加非特異性結合。
圖3. 參考基準測試數據，顯示Dynabeads磁性產品的表現性能最佳、產量最高且非特異性結合最少。我們的磁珠同時省略不必要的操作步驟，以最快的流程改善您的實驗室生活。
在KingFisher儀器上使用Dynabeads和Pierce磁珠，進行直接或間接免疫沉澱實驗。
抗體與磁珠結合。Dynabeads和Pierce磁珠預先包被protein A、protein G、抗小鼠IgG或抗兔IgG抗體，由於快速動力學，加入的抗體僅需反應10分鐘即可與磁珠結合。生物素化抗體(biotinylated antibody)也可與鏈黴親和素偶聯(streptavidin-coupled)的Dynabeads和Pierce磁珠結合使用。在磁座上對磁珠進行一次性清洗，以去除未結合的抗體。
將樣品添加到磁珠中。將含有蛋白質的樣品加入已經洗滌後並帶有結合抗體的磁珠中，靜待反應10分鐘以結合感興趣的目標蛋白質。
如果是低豐度或低親和力的蛋白質，反應時間可增至1小時或放隔夜；但通常10分鐘的反應時間已足夠。
清洗結合蛋白質的磁珠。為維持結合目標蛋白質的高純度，在磁座上用緩衝液清洗磁珠2至4次，以去除所有未結合的蛋白質。此高效分離過程確保了高訊噪比。
洗脫蛋白質。如有需求，可透過溫和的洗脫程序或變性洗脫程序將蛋白質從磁珠上沖洗下來(詳見下列的洗脫說明)。
在您的免疫沉澱實驗使用Thermo Scientific磁珠。用磁珠進行免疫沉澱過程的動圖。
磁珠上的重組protein A和/或protein G因不含白蛋白(albumin)的結合位點，所以避免因共同純化而造成的污染。抗體與磁珠在溶液中結合是一種平衡反應。為了盡量獲取較多抗體，應保持少量反應體積以維持高濃度的磁珠和抗體。無須預處理樣品(即使是黏稠樣品)，因此不需對樣品或磁珠進行稀釋。如果擔心樣品中抗體濃度非常低，可以增加磁珠的使用量。
使用Thermo Scientific Pierce Crosslink Magnetic IP/Co-IP試劑盒，是從磁珠上洗脫抗體的另一選擇。
為了防止發生共洗脫，可以在免疫沉澱之前將抗體與磁珠上的protein A/G交叉聯結。
這一步驟對於若要在SDS-PAGE後續進行自動放射顯影術或Western Bloggint是非必要的，而對於銀染或考馬斯亮藍染色(coomassie dye)時則為選擇性步驟。
後續實驗將會影響您要挑選的已結合抗體產品。
已結合抗體的產品是最常用的方法，您的目標抗體與磁珠將直接結合、或與磁珠表面上預包被的配體(ligand)間接結合。
| Protein A, G, A/G | Secondary antibodies (anti-mouse, anti-rabbit) | Surface-activated beads | |
|---|---|---|---|
| Products | Beads only:Kits: | Beads only: | Beads only:Kits: |
| Binding properties | Non-covalent antibody binding | Non-covalent antibody binding | Covalent antibody binding |
| Antibody co-eluted off the beads | Yes† | Yes† | No |
| Type of ligand | Different ligands bind different species and antibody subclasses with different specificity‡ | Anti-mouse binds mouse IgG1, IgG2a, IgG2b; anti-rabbit binds all rabbit IgGs | All antibodies |
| Mass spec compatible | Yes (Pierce MS-Compatible Magnetic IP Kit, protein A/G) Not validated (Protein A, G) | No | Yes |
| Nonspecific binding | Low | Low | Ultra-low |
* 表面活化Dynabeads磁珠－適用於結合和捕獲更多標靶，查看更多Dynabeads相關產品。
† 交叉聯結(Crosslinking)可以避免抗體的共洗脫，但會降低目標抗原的產量。
‡ 了解哪一個已結合抗體的蛋白質是您免疫沉澱抗體的最佳選擇。
為提高靈活性，我們提供四種和鏈黴親和素(streptavidin)偶聯的 Dynabeads磁珠。請於Dynabeads鏈黴親和素選擇指南中查閱不同的特性。
在過去的25年中，鏈黴親和素偶聯的Dynabeads與生物素(biotin)化配體相結合，廣泛存在多種手動和自動化應用，論文引用已破數千次。鏈黴親和素偶聯的Dynabeads最廣泛應用領域是在核酸純化及次世代定序(NGS)等工作流程，然而其亦可用於免疫沉澱實驗(IP)。
適用重組蛋白表達的熱門融合標籤包括：
His和GST並非真正的表位標籤，因為其通常不是透過特異性抗體進行純化或檢測。相較之下，HA和c-Myc標籤是真正的表位標籤，因為它們只能透過特異性抗體進行純化或檢測。表位標籤很少用於批量純化，但經常用於免疫沉澱或免疫共沉澱。然而，以上四種標籤系統均可用於純化或pull-down技術應用。
Dynabeads在免疫沉澱(IP)性能持續超越其他方法或磁珠解決方案。還在使用Sepharose或瓊脂糖珠漿(agarose bead slurry)嗎?查看關於免疫沉澱的常見迷思。
圖1. Dynabeads磁珠具有更短的操作時間和更高的產量。根據製造商的操作手冊，採取與抗體及細胞裂解物等量的樣品材料進行免疫沉澱實驗。
結果顯示使用Dynabeads方法，所有磁珠表面的抗體均能有效地與抗原結合，並獲得最佳且高再現性的結果。
圖2. 您選擇的磁珠將影響結果。Dynabeads磁珠的表面清晰可完成有效結合，且不會有內層捕獲不想要蛋白質的狀況。(A) Dynabeads產品用的是一致性最佳、單顆、超順磁性的磁珠，生產品質嚴格管控以達高再現性。(B－D) 顯示其他供應商的磁性顆粒形狀和尺寸不一且容易捕獲雜質，導致較低的再現性並增加非特異性結合。
圖3. 參考基準測試數據，顯示Dynabeads磁性產品的表現性能最佳、產量最高且非特異性結合最少。我們的磁珠同時省略不必要的操作步驟，以最快的流程改善您的實驗室生活。
在KingFisher儀器上使用Dynabeads和Pierce磁珠，進行直接或間接免疫沉澱實驗。
The publication trend for immunoprecipitation says it all. The number of publications citing the use of Dynabeads magnetic beads vs. other technologies and products for immunoprecipitation procedures is skyrocketing.
Dynabeads IP citations.
Dynabeads ChIP citations.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
