根据样本类型分类的 RNA 提取-组织提取RNA-赛默飞 | Thermo Fisher Scientific - CN

从组织或细胞中提取RNA时，首先要对细胞进行裂解和变性处理，以释放总核酸。无论您是从培养细胞或组织样本开始，还是从植物、细菌或哺乳动物细胞开始，Thermo Fisher Scientific的 RNA 提取试剂和试剂盒都能为您的研究提供合适的产品。Thermo Fisher Scientific 品牌包括传统的 Invitrogen产品，如值得信赖的TRIzol 试剂和PureLink 纯化试剂盒，以及Cells-to-C_T、MagMAX和RNAlater 试剂盒和试剂等优质产品。

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视频：如何从组织或细胞中分离 RNA

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储存并稳定 RNA 样品

RNAlater 溶液被广泛用于保存完整动物组织、器官、细胞和细菌中的 RNA。有了这种溶液，无需立即处理样本以进行 RNA 分离，也无需将样本冷冻在液氮中以便日后处理。

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 用于稳定和储存的 RNA later

组织样本中的 RNA 提取

从组织样本中提取 RNA 包括从特定组织中分离和纯化 RNA 分子。这种方法需要提取组织样本，而组织样本可通过活检或外科手术等各种技术获得。然后将组织均质化，破坏细胞并释放 RNA。提取得到的 RNA 可能包含组织中不同细胞类型的混合物，这可能导致 RNA 成分的差异。因此，必须仔细选择组织样本的类型和大小，以帮助确保所需细胞群具有代表性。

选择指南：用于从组织中分离 RNA 的试剂盒

	高纯度、完整 RNA 的金标准	简单、可靠、快速的方法	基于柱式、过滤板形式，可快速、方便地检测 96 个样品（RNA >200 nt）	从有限的样本起始量（RNA >200 nt）中采用快速便捷的柱式方法	快速便捷的小 RNA 分离法	较高纯度 TRIzol + 柱式纯化，无需沉淀	HTP 形式，能够回收各种大小的 RNA（包括 microRNA）
	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购
	TRIzol 试剂	PureLink RNA 小量试剂盒	PureLink Pro 96 总 RNA 纯化试剂盒	PureLink RNA 微量试剂盒	mirVana miRNA 分离试剂盒	TRIzol Plus RNA 纯化系统	MagMAX mirVana 总 RNA 分离
畅销产品	✓
分离方法	高纯度有机提取（需要酒精沉淀）	快速、便利的硅胶柱	快速、便捷的硅胶柱，带过滤板	快速、便捷的微硅胶柱	有机提取结合便捷的硅胶柱	纯度和便利性很高；同时包括有机提取和硅胶柱（无需沉淀）	磁珠法，可扩展，形式灵活
制备时间	1小时	20分钟	20分钟	20分钟	30分钟	1小时	<1小时
起始材料用量	至多 100 mg	10 mg 至 100 mg	10个细胞至 10 mg	至多 10 mg	至多 250 mg 组织	至多 100 mg	至多 50 mg
兼容高通量			✓				✓
制备规模	100 次制备	50 次制备	96 次制备	50 次制备	96 次制备	50 次制备	96 次制备

如何从组织中提取 RNA ？

采集组织样本，立即用液氮速冻或保存在 -80°C 温度下。
使用预冷的研钵和研杵或匀浆器将组织样本研磨成细粉。
将 Trizol 或其他 RNA 提取试剂添加到装有组织样本的试管中，根据样本大小按照建议的量添加。用力涡旋使细胞裂解。
将试管在室温下孵育 5 分钟。
在试管中加入等体积的氯仿。用力摇晃 15 秒钟。
在 4°C 下高速离心（12,000-16,000 x g）15 分钟。
将上层水相转移到一个新的试管中，避开中间相和有机相。
在试管中加入等体积的异丙醇并轻轻混合。室温下孵育 10 分钟。
在 4°C 下高速离心 10 分钟，以沉淀 RNA。
去除上清液，用 75% 乙醇洗涤 RNA 沉淀，并在 4°C 下再次离心 5 分钟。
移去乙醇，让空气干燥 RNA 沉淀，并将其溶解在无 RNase 水或适当的缓冲液中。在此步骤中，可选择使用 DNase I 处理 RNA 样品以去除基因组 DNA 污染。
加入 RNase 抑制剂以防止 RNA 降解，并将 RNA 样品保存在 -80°C 温度下，或用于下游应用。

注意：本方案概述了使用 Trizol 或类似试剂从组织中提取RNA 的基本过程。请务必参阅试剂随附的具体说明，了解详细的指导原则和安全预防措施。

从组织中提取 RNA 的资源

从细胞中提取 RNA

细胞 RNA 提取是专门从培养细胞或细胞悬浮液中分离 RNA 的过程。这种方法需要用酶消化细胞膜，以释放包括 RNA 在内的细胞内容物。与组织样本不同，细胞培养物提供的细胞群更均匀，因此可以对细胞群内的基因表达进行更具特异性的分析。此外，细胞培养物可在受控条件下进行操作和处理，有助于更轻松地研究各种实验干预对 RNA 表达的影响。

使用 Cells-to-C_T 试剂盒，从细胞到 qPCR 结果只需几分钟时间

您也可以分析培养细胞裂解物，而无需先分离 RNA。在更短的时间内，您就能获得与纯化 RNA 相当的 qPCR 结果，有时甚至比纯化 RNA 的结果更好。Invitrogen公司产品，如Cells-to-C_T和 Single Cell-to-C_T产品线，具有巨大的性能和处理优势。

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能否从细胞中提取 RNA ？

是的，可以从细胞中提取 RNA。与从组织样本中提取 RNA 相比，这一过程略有不同，因为培养细胞通常是同质的细胞群，而组织则更为异质，包含许多细胞群和细胞外基质。

从细胞培养物中分离 RNA 选择指南

	高纯度、完整 RNA	快速便捷的柱式 RNA (>200 nt) 分离	基于柱式、过滤板形式，可快速、方便地检测 96 个样品（RNA >200 nt）	从有限的样本起始量（RNA >200 nt）中采用快速便捷的柱式方法	快速便捷的小 RNA 分离法	从细胞至 qRT-PCR 的完整系统，无需 RNA 纯化
	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购
	TRIzol 试剂	PureLink RNA 小量试剂盒	PureLink Pro 96 总 RNA 纯化试剂盒	PureLink RNA 微量试剂盒	MirVana miRNA 分离试剂盒	Cells-to-C_T 试剂盒
畅销产品	✓	✓			✓	✓
制备时间	1小时	20分钟	20分钟	20分钟	30分钟	<10分钟
细胞裂解方法	高纯度有机提取（需要酒精沉淀）	无毒胍-异硫氰酸酯裂解	无毒胍-异硫氰酸酯裂解	无毒胍-异硫氰酸酯裂解	有机提取然后酒精沉淀	Cells-to-C_T 裂解
起始材料用量	至多1x10⁷个细胞	5x10⁶到1x10⁸个细胞	5x10⁶到1x10⁸个细胞	至多5x10⁵个细胞	10²-10⁷个培养细胞	10-100,000 个细胞
应用	所有 RNA 表达方法	qRT-PCR、NGS	qRT-PCR、NGS	qRT-PCR、NGS	Micro RNA 分析	qRT-PCR

从细胞培养中分离 RNA 的资源

FFPE RNA 提取

从福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 样本中提取 RNA 是分子生物学研究中的一项重要技术。FFPE 样本通常用于临床和病理研究，因为它们提供了宝贵的存档组织标本。然而， FFPE 样本的保存过程可能会导致 RNA 严重降解和交联，从而使提取过程充满挑战。

从 FFPE 样品中提取 RNA 的方法涉及几个关键步骤。

首先，使用有机溶剂去除石蜡，对 FFPE 组织切片进行脱蜡处理。
接下来，对组织进行再水化并使用蛋白酶 K 处理，以消化蛋白质并逆转交联。
接着使用各种方法进行 RNA 提取，例如柱法纯化或酚氯仿提取。
最后，使用分光光度法或电泳等技术对提取的 RNA 进行质量和数量评估。

由于 FFPE 样本中的 RNA 可能会发生降解和交联，因此提取的 RNA 可能无法达到较高质量。因此，必须仔细评估 RNA 的完整性，并考虑使用专为降解 RNA 设计的方法，如 RT-qPCR 或 RNA 测序。

有几个因素会影响从 FFPE 组织中分离出的 RNA 的整体质量和产量。以下是处理 FFPE 样品时的建议摘要：

上游组织采集和组织标本制备-如果可能，应在手术切除后一小时内固定组织。在固定过程完成之前，RNA 会发生广泛降解。较优固定时间为 12-24 小时，使用中性福尔马林或多聚甲醛缓冲液。固定组织应在包埋前彻底脱水。
切片存放-尽可能存放没有切面的切片，以防止因暴露于大气中的氧气、水和其他环境因素（如光照和虫害（真菌、昆虫等））而造成持续损坏。
用于 RNA 分离的组织类型、大小和数量—建议组织厚度为 10 – 20 µm。切片数量取决于组织类型 (影响细胞密度) 和表面积 (建议尺寸：50-300 mm²）。原始材料过量会导致过滤器堵塞，使产量下降。
用于包埋组织的石蜡过量-在可能的情况下，应在开始纯化方案之前修剪掉多余的石蜡。对于基于二甲苯的纯化方法，两种室温下的二甲苯处理方法应足以脱蜡。如果需要，可以在至多 30 分钟内进行更严格的 37–55°C 处理。二甲苯脱腊后，100% 的乙醇必须完全去除，两次 100%乙醇洗涤后颗粒必须干燥。磁珠法采用了新颖的化学方法来处理石蜡，因为石蜡限制了样品量为 20 µm 的切片。

FFPE RNA 分离试剂盒选择指南

	低通量分离同一 FFPE 切片中的 RNA 和 DNA	可扩展规模的分离同一 FFPE 切片中的 RNA 和 DNA
	立即订购	立即订购
	RecoverAll 总核酸分离试剂盒用于 FFPE 样品	MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra 试剂盒
制备时间	4.5小时（16 个样品的总时间） 2.5 小时实际操作时间	4 小时（96 次制备的总时间） 1 小时实际操作时间
提取的最终产物	总 RNA、microRNA、基因组DNA	总 RNA、microRNA、基因组DNA
分离方法	柱法纯化	磁珠纯化
需要脱蜡	✓	✓
自动化兼容（脱蜡后）		✓ （KF Flex和Duo Prime的脚本）
适用 FFPE 样品范围	至多 4 x 20 μm切片（300 mm²组织）	至多 2 x 20 μm切片（300 mm²组织）
样品体积	~50 µL 纯化 DNA ~50 µL 纯化 RNA	~50 µL 纯化 DNA ~50 µL 纯化 RNA
与 Ion AmpliSeq DNA j检测板（如 Cancer Hotspot Panel v2）兼容	✓	✓
与 Ion AmpliSeq DNA j检测板（如 RNA 癌症和 RNA 融合）兼容	✓	✓

FFPE RNA 提取的资源

植物RNA提取试剂盒

植物 RNA 提取涉及多个关键步骤，包括组织均质化以破坏细胞壁，使用提取试剂进行处理以溶解细胞组分，去除污染物以及纯化提取的 RNA。由于存在坚硬的细胞壁和大量次生代谢物，从植物样本中提取 RNA 的方法面临着独特的挑战。

植物 RNA 分离辅助产品，用于从植物样本中纯化总 RNA

植物 RNA 分离的主要问题之一是存在有干扰的生物分子，如多酚化合物和多糖。通过添加聚乙烯吡咯烷酮（一种可与多酚和多糖结合的高分子量聚合物）和预提取离心步骤，Invitrogen 植物 RNA 分离产品可尽可能地减少这些污染物。

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植物 RNA 提取试剂盒选择指南

	非常适合困难样本（针叶树组织 & 种子）	快速 & 易用	高效回收 microRNA &小 RNA	快速 & 全自动
	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购
	植物 RNA 试剂	PureLink RNA 小量试剂盒	mirVana miRNA 分离试剂盒	MagMAX-96 总 RNA 分离试剂盒
畅销产品			✓
分离的 RNA 类型	仅针对大分子 RNA	仅针对大分子 RNA	小 & 大分子 RNA	仅针对大分子 RNA
制备时间	60分钟	<20分钟	30分钟	<45分钟
起始材料用量	至多 1 g	<250 mg	0.5至 250 mg	至多 10 mg
分离方法	高纯度有机提取（需要酒精沉淀）	快速、便利的硅胶柱	高纯度& 便利；包括有机萃取 & 硅胶柱（无需沉淀）	磁珠法，可扩展，形式灵活
兼容高通量				✓

植物 RNA 分离的资源

血液 RNA 提取试剂盒

与培养细胞或组织样品不同，从血液样品中提取 RNA 需要进行额外的细胞分离和裂解步骤，以便从血细胞中释放 RNA。此外，血液样本中可能含有各种类型的细胞，包括红细胞、血小板和白细胞的不同亚群，这会导致 RNA 成分的差异。因此，有必要仔细考虑特定的血液样本和适当的方案，以帮助确保成功提取 RNA。

从血液样本中提取 RNA 涉及几个关键步骤。首先，采集并处理血液样本，将含有白细胞的细胞组分从血浆或血清中分离出来。然后裂解细胞组分以释放 RNA，并用试剂处理裂解液，以稳定和保护 RNA 免受降解。RNA 提取试剂盒使用柱法纯化或酚氯仿提取等方法从血细胞中分离出 RNA。

血液 RNA 提取试剂盒选择指南

特点	经过优化，可用于液体样本	专用试剂盒能去除无核红细胞	96离心柱过滤板柱，满足 HTP 的需求	HTP 经过优化，可用于稳定血液样本的纯化	HTP 形式，能够回收各种大小的 RNA（包括 microRNA）	直接从全血中获得较高 RNA 得率，无需分离白细胞
	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购
	TRIzol LS	PureLink 血液总 RNA 试剂盒	PureLink Pro 96 总 RNA 纯化试剂盒	MagMAX 稳定血液管 RNA 分离试剂盒	MagMAX mirVana 总 RNA 分离	RiboPure 血液试剂盒
畅销产品						✓
兼容的稳定试剂	EDTA、肝素、柠檬酸盐、RNAlater	EDTA、肝素、柠檬酸盐	EDTA、肝素、柠檬酸盐	Tempus 或 PaxGene 管	EDTA 或柠檬酸盐	EDTA、肝素、柠檬酸盐、RNAlater
所含稳定试剂						✓ RNAlater
分离方法	高纯度有机提取（需要酒精沉淀）	快速、便利的硅胶柱	快速、便捷的板式硅胶柱	磁珠法，可扩展，形式灵活	磁珠法，可扩展，形式灵活	纯度高 & 便利；包括有机提取 & 和硅胶柱（无需沉淀）
制备时间	1小时	20分钟	10-40分钟	2小时内12管	<1小时内96份样本	30分钟
适合高通量			✓	✓	✓

用于 RNA 提取的采血管

Tempus 血液 RNA 管可用于在采集点稳定和纯化全血中的 RNA，以便进行下游检测。每个 Tempus 管均含有一种稳定和裂解试剂，无需进行后续红细胞裂解或蛋白酶 K 处理。RNA 稳定试剂可灭活 RNase 和选择性沉淀 RNA。一旦 RNA 分解，还可以从保存在 Tempus 管中的血液样品上清液中分离出基因组 DNA。

从血液中分离 RNA 的资源

从酵母中分离 RNA

与培养细胞或组织样本不同，从酵母样本中提取 RNA 相对简单，因为没有复杂的细胞结构，如植物细胞的细胞壁或动物组织的细胞-细胞连接。此外，酵母样本中通常含有同质的细胞群，从而简化了提取过程，并有助于减少 RNA 成分的变异性。

从酵母样本中提取 RNA 的方法包括三个简单步骤：1）收获并裂解酵母细胞，通过酶解或机械破坏释放 RNA；2）用提取试剂处理裂解液，以溶解细胞成分并保护 RNA 不被降解；3）通过柱式纯化或酚氯仿提取法提取 RNA。

酵母 RNA 分离选择指南

	快速 &全自动	快速 & 易用	专为刚性酵母细胞壁设计，同时保持表达谱	基于柱式、过滤板形式，可快速、方便地检测 96 个样品（RNA >200 nt）
	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购
	Platinum Taq MagMAX 微阵列总 RNA 分离试剂盒	PureLink RNA 小量试剂盒	RiboPure-酵母试剂盒	PureLink Pro 96 总 RNA 纯化试剂盒
畅销产品		✓
包括专用于细胞裂解的磁珠	否	否	氧化锆珠	否
分离方法	可扩展，形式灵活，能实现较高纯度；包括有机提取和磁珠	快速、便利的硅胶柱	纯度和便利性很高；同时包括有机提取和硅胶柱	快速、便捷的硅胶柱，带96孔过滤板
制备时间	<1小时	20分钟	90分钟（包括 DNase 处理）	20分钟
起始材料用量	至多6x10⁵个细胞	至多8x10⁵个细胞	至多3x10⁸个细胞	1.8 mL 新鲜对数期酵母细胞 (OD660=0.6–0.8)
兼容高通量	✓
试剂盒规格	96 次制备	50 次制备	50 次制备	96 次制备

酵母 RNA 分离的资源

细菌RNA提取

与培养细胞或组织样本相比，从细菌样本中提取 RNA 相对简单，因为没有复杂的细胞结构。细菌样本中通常含有同质的细胞群，从而简化了 RNA 提取过程，并有助于减少 RNA 成分的变异性。此外，细菌样本可能还需要额外的步骤，如用酶处理去除污染的 DNA，并获得纯净的 RNA 样本。

与酵母样本中的 RNA 分离类似，从细菌样本中提取 RNA 的方法包括三个简单步骤：1) 收获细菌细胞并进行裂解，通过酶消化、机械破坏或化学裂解释放 RNA；2) 用提取试剂处理裂解液，以溶解细胞成分并保护 RNA 免受降解；3) 通过柱式纯化或酚氯仿提取法提取 RNA。

选择指南：细菌RNA提取试剂盒

	无裂解程序	快速 & 简易方案，20 分钟	以硅胶柱为基础，采用过滤板形式，快捷方便	HTP 兼容， 45 min
	立即订购	立即订购	立即订购	立即订购
	TRIzol Max 细菌 RNA 分离试剂盒{139｝	PureLink RNA 小量试剂盒	PureLink Pro 96 总 RNA 纯化试剂盒	MagMAX 总核酸分离试剂盒
畅销产品		✓
包括专用于细胞裂解的磁珠	否	否	否	氧化锆珠
分离方法	高纯度有机提取（需要酒精沉淀）	快速、便利的硅胶柱	快速、便捷的硅胶柱，带96孔过滤板	磁珠法，可扩展，形式灵活
制备时间	1小时	20分钟	20分钟	45分钟
起始材料用量	至多1x10⁸个细胞	至多1x10⁹个细胞	至多1x10⁹ 个细胞	最多可检测 0.3 g 固体样品或 175 µL 液体样品
兼容高通量			✓	✓
试剂盒规格	100 次制备	50 次制备	96 次制备	100 次制备

细菌 RNA 分离的资源

组织