RNase 是催化 RNA 切割的酶,导致 RNA 降解。RNase 在关键细胞和生物过程中具有重要作用。但是,研究人员在使用 RNA 的实验室空间中,不需要 RNase。这是 RNA 难以与 RNA 一起使用的原因之一— RNase 无处不在,防止 RNase 污染对保护您的实验结果和研究至关重要。可检测的 RNA 酶的类型包括:
如果处理 RNA,RNase 污染无疑是一个潜在问题,因为 RNase 容易降解 RNA。如果实验室空间或样品被 RNase 污染,可通过检测 RNase 活性检测 RNase 是否存在。
建议至少每月进行一次水源 RNase 检测。对于在实验台制备的试剂、表面和样品,科学家建议根据需要检测 RNase 活性。
RNase 检测试剂盒可用于确定缓冲液、试剂或实验室空间是否被 RNase 污染。选择 RNase 检测试剂盒时,请务必识别该试剂盒可检测的 RNase 类型以及试剂盒的灵敏度(检测限下限)。大多数 RNase 检测试剂盒通过基于荧光的检测来检测是否存在 RNase 活性。
RNaseAlert RNase 检测试剂盒是一种灵敏且易于使用的荧光检测法,可在 30 分钟方案中检测到低至 3.5 x 10 -7 单位 (∼0.5 pg) 的 RNase A。RNaseAlert 试剂盒在一端使用荧光报告基因标记的 RNA 底物,另一端使用淬灭剂标记。在不存在 RNase 的情况下,淬灭剂和报告基因彼此之间是接近的。然而,当 RNA 酶存在时,淬灭剂和报告基因在溶液中的空间上分离,因为 RNA 底物被裂解。这就产生了荧光信号,这可以容易地通过紫外光照射或使用基于滤光片或单色仪的荧光计进行检测。
RNaseAlert 底物的序列经过精心优化,可检测几种 RNase,包括 RNase A、RNase T1、RNase I、微球菌核酸酶、S1 核酸酶、绿豆核酸酶和 Benzonase。
RNaseAlert 以两种便捷试剂盒形式提供:1) RNaseAlert 实验室检测试剂盒适用于检测少量样品,可用于帮助确保溶液,试管,吸头等不含 RNase。2) RNaseAlert QC 系统设计用于 96 孔规格的高通量检测。本试剂盒包含足够的底物,可使用荧光计检测 480 份样品 (5 x 96)。
注: 在常规蛋白纯化过程中监测核酸酶污染— RNaseAlert 检测法的一种非常有用的应用是在蛋白纯化过程中检测蛋白组分以确定是否存在污染物 RNase。在蛋白质纯化过程中消除所有痕量 RNase 有时会令人望而生畏。同时监测所需蛋白和污染核酸酶的洗脱曲线,有助于设计从所需蛋白中分离 RNase 的纯化方案。如果离子强度和 pH 值不抑制任何污染性 RNase,则可在 RNaseAlert 检测中直接监测大多数色谱柱组分。RNase 在 pH 值范围为 6-9 的低于 200 mM 的盐溶液中具有活性,因此在检测之前,可以将具有更高离子强度的缓冲液稀释在水或 1X RNaseAlert 缓冲液中。