分子级质粒分离技术通常速度更快，更具成本效益，最适用于克隆、核酸标记、 PCR 和测序等不需要高纯水平的强大分析应用。我们的 GeneJET 质粒 DNA 纯化试剂盒最适用于分子级质粒 DNA 的分离。
转染级质粒纯化技术可用于纯化水平和产量要求比分子级质粒 DNA 更高的应用。我们的 PureLink HiPure 质粒纯化试剂盒和 PureLink 快速低内毒素质粒纯化试剂盒为更敏感的标准细胞系转染和体外转录等分析应用提供了更高的产量和更低的内毒素水平。转染级质粒 DNA 也适用于所有分子级应用，如克隆或测序。
先进的转染级质粒分离技术适用于最敏感的分析应用，也可用于所有分子级和转染级分析应用。我们的 PureLink Expi 无内毒素质粒纯化试剂盒可快速纯化大规模无内毒素（<0.1 EU/μg）质粒，尤其适用于敏感细胞系（即原代细胞）的转染和体内实验（基因治疗、显微注射和疫苗研究）。
下游应用 | 纯化等级 | ||
|---|---|---|---|
| 分子 | 转染 | 高级转染 | |
| GeneJET 试剂盒 | PureLink HiPure 试剂盒 和 PureLink 快速低内毒素试剂盒 | PureLink Expi 无内毒素试剂盒 | |
| 敏感型转染（即原代细胞） | |||
| 疫苗研究 | |||
| 显微注射 | |||
| 基因治疗研究 | |||
| 体外转录 | |||
| 标准转染 | |||
| 克隆 | |||
| 核酸标记 | |||
| PCR | |||
| 测序 | |||
| 转化 | |||
| 迷思
| 已纯化质粒 DNA 中的内毒素可降低所有细胞系的转染效率和活力，需要进行“无内毒素”（<0.1 EU/μg）质粒纯化。 | |
| 科学事实
| 只有高内毒素含量（> 10 EU/μg）才能对标准细胞系中的转染、蛋白质表达和活力产生负面影响。原代或干细胞的转染以及其他体内分析等敏感型分析均需要无内毒素（<0.1 Eu/μg）质粒 DNA。1 | |
我们的解决方案 | 借助阴离子交换质粒纯化系统（如 PureLink HiPure 和 PureLink 快速低内毒素试剂盒）获得低水平内毒素（0.1-10 EU/μg）是大多数转染分析的理想选择。对于更敏度的分析应用，建议分离高级转染级无内毒素质粒 DNA（<0.1 EU/μg）。 |
内毒素值可随细菌菌株、质粒骨架和细菌沉淀大小而不同。低内毒素是大多数转染实验的理想选择。1
能否成功转染取决于是否具有高转染效率和低细胞毒性。转染效率是指转运至细胞中的分子（这里指质粒 DNA）的量。转染效率受多个不同条件的影响，包括质粒 DNA 的品质。
使用 PureLink HiPure 质粒 和 PureLink 快速低内毒素试剂盒一次性纯化的质粒 DNA 具有高转染效率和使用其他高纯度阴离子交换纯化试剂盒提取的 DNA 的低细胞毒性。根据 2000 年进行的研究，用于转染研究的细胞系不需要无内毒素 DNA。事实上，只有内毒素水平至少达到 10,000 EU 的情况下才显著影响细胞增殖和活力。
| 细胞系与 PureLink HiPure 和 PureLink 快速低内毒素试剂盒兼容 | ||
|---|---|---|
|
|
|
内毒素，也称脂多糖或 LPS，是革兰氏阴性菌如大肠杆菌的质膜组成部分（图 1），也是质粒中的常见污染物。内毒素水平的报告单位通常为每微克质粒 DNA 中的内毒素单位（EU/μg DNA）。在质粒纯化过程中，裂解细菌中释放出大量内毒素，由于这些分子与质粒 DNA 具有相似的化学性质，因此，它们倾向于发生共纯化。 根据质粒 DNA 下游应用的不同，研究人员可能希望使用专用试剂盒来降低抽提内毒素水平。
 | 图 1. 革兰氏阴性菌菌膜组成图。来源：Kenneth Todar，威斯康星大学麦迪逊分校细菌系，细菌学在线教材。 |
根据下游应用的不同，质粒中的内毒素水平可能对实验结果产生负面影响。内毒素水平影响转染试剂和质粒之间的相互作用，从而降低质粒递送和基因表达的效率。一些细胞系对内毒素敏感，它们的活力将受内毒素水平的影响，并且将明显改变细胞内生物学性质。 此外，内毒素水平可激活细胞培养或动物实验中不需要的免疫应答。
我们提供一系列具有不同内毒素消耗量的质粒分离试剂盒，适用于不同的分析应用。这些试剂盒使用各种专有树脂和缓冲液，得到的质粒适用于各种分子生物学应用（> 10 EU/μg）、标准转染应用（0.1-1.0 EU/μg，“低内毒素”）和高级转染应用（<0.1 EU/μg，“ 无内毒素）。GeneJET 质粒纯化试剂盒中的硅基树脂能够纯化得到 > 10 EU/μg 的质粒，适用于测序、克隆和 PCR 分析等分子生物学应用。PureLink HiPure 和 PureLink 快速低内毒素试剂盒能够纯化得到低内毒素（0.1 - 1.0 EU/μg）的质粒 DNA，适用于标准转染应用。PureLink Expi 内毒素试剂盒采用新型阴离子交换膜及专有内毒素去除缓冲液和无内毒素组分，可快速进行无内毒素（<0.1 EU/μg）质粒纯化，适用于任一下游应用，包括转染至敏感细胞系和体内实验。
其中一种测量内毒素水平的方法涉及测量内毒素与鲎（马蹄蟹）变形细胞中可凝结蛋白质之间的凝结反应。 更灵敏的光度检测基于鲎变形细胞裂解物（LAL）和合成产色底物。该 LAL 法用于生物溶液中内毒素水平的常规分析，是首次获得 FDA 认证的检测方法。
| 迷思
| 已纯化质粒 DNA 中的内毒素可降低所有细胞系的转染效率和活力，需要进行“无内毒素”（<0.1 EU/μg）质粒纯化。 | |
| 科学事实
| 只有高内毒素含量（> 10 EU/μg）才能对标准细胞系中的转染、蛋白质表达和活力产生负面影响。原代或干细胞的转染以及其他体内分析等敏感型分析均需要无内毒素（<0.1 Eu/μg）质粒 DNA。1 | |
我们的解决方案 | 借助阴离子交换质粒纯化系统（如 PureLink HiPure 和 PureLink 快速低内毒素试剂盒）获得低水平内毒素（0.1-10 EU/μg）是大多数转染分析的理想选择。对于更敏度的分析应用，建议分离高级转染级无内毒素质粒 DNA（<0.1 EU/μg）。 |
内毒素值可随细菌菌株、质粒骨架和细菌沉淀大小而不同。低内毒素是大多数转染实验的理想选择。1
能否成功转染取决于是否具有高转染效率和低细胞毒性。转染效率是指转运至细胞中的分子（这里指质粒 DNA）的量。转染效率受多个不同条件的影响，包括质粒 DNA 的品质。
使用 PureLink HiPure 质粒 和 PureLink 快速低内毒素试剂盒一次性纯化的质粒 DNA 具有高转染效率和使用其他高纯度阴离子交换纯化试剂盒提取的 DNA 的低细胞毒性。根据 2000 年进行的研究，用于转染研究的细胞系不需要无内毒素 DNA。事实上，只有内毒素水平至少达到 10,000 EU 的情况下才显著影响细胞增殖和活力。
| 细胞系与 PureLink HiPure 和 PureLink 快速低内毒素试剂盒兼容 | ||
|---|---|---|
|
|
|
内毒素，也称脂多糖或 LPS，是革兰氏阴性菌如大肠杆菌的质膜组成部分（图 1），也是质粒中的常见污染物。内毒素水平的报告单位通常为每微克质粒 DNA 中的内毒素单位（EU/μg DNA）。在质粒纯化过程中，裂解细菌中释放出大量内毒素，由于这些分子与质粒 DNA 具有相似的化学性质，因此，它们倾向于发生共纯化。 根据质粒 DNA 下游应用的不同，研究人员可能希望使用专用试剂盒来降低抽提内毒素水平。
| 图 1. 革兰氏阴性菌菌膜组成图。来源：Kenneth Todar，威斯康星大学麦迪逊分校细菌系，细菌学在线教材。 |
根据下游应用的不同，质粒中的内毒素水平可能对实验结果产生负面影响。内毒素水平影响转染试剂和质粒之间的相互作用，从而降低质粒递送和基因表达的效率。一些细胞系对内毒素敏感，它们的活力将受内毒素水平的影响，并且将明显改变细胞内生物学性质。 此外，内毒素水平可激活细胞培养或动物实验中不需要的免疫应答。
我们提供一系列具有不同内毒素消耗量的质粒分离试剂盒，适用于不同的分析应用。这些试剂盒使用各种专有树脂和缓冲液，得到的质粒适用于各种分子生物学应用（> 10 EU/μg）、标准转染应用（0.1-1.0 EU/μg，“低内毒素”）和高级转染应用（<0.1 EU/μg，“ 无内毒素）。GeneJET 质粒纯化试剂盒中的硅基树脂能够纯化得到 > 10 EU/μg 的质粒，适用于测序、克隆和 PCR 分析等分子生物学应用。PureLink HiPure 和 PureLink 快速低内毒素试剂盒能够纯化得到低内毒素（0.1 - 1.0 EU/μg）的质粒 DNA，适用于标准转染应用。PureLink Expi 内毒素试剂盒采用新型阴离子交换膜及专有内毒素去除缓冲液和无内毒素组分，可快速进行无内毒素（<0.1 EU/μg）质粒纯化，适用于任一下游应用，包括转染至敏感细胞系和体内实验。
其中一种测量内毒素水平的方法涉及测量内毒素与鲎（马蹄蟹）变形细胞中可凝结蛋白质之间的凝结反应。 更灵敏的光度检测基于鲎变形细胞裂解物（LAL）和合成产色底物。该 LAL 法用于生物溶液中内毒素水平的常规分析，是首次获得 FDA 认证的检测方法。
核酸纯化和核酸分析支持中心
查看核酸纯化和分析实验技巧、疑难解答帮助等资源。
DNA纯化和分析指南
RNA分离纯化指南
高级质粒DNA纯化：从转染级到无内毒素超净级制备
新款 PureLink Expi 无内毒素质粒纯化包
