Nunclon Sphera 3D 培养系统
Thermo Scientific Nunclon Sphera 培养系统设计用于拟球体(例如 3D 肿瘤细胞球状体)和类器官培养(例如脑类器官),提供从培养板到培养皿和培养皿的多种包装形式。3D 细胞培养表面几乎杜绝细胞附着到培养器皿上,通过天然分泌的细胞外基质(ECM)细胞-细胞聚集支持 3D 拟球体和类器官的构建。
低细胞粘附性表面
Nunclon Sphera 专利的表面涂层可以阻止蛋白质在培养皿表面吸附,从而尽可能减少了单层细胞与培养容器的粘附。
图 1.与标准细胞培养瓶 (例如,Nunclon Delta)相比 Nunclon Sphera 3D 培养瓶上所观察到的 3 种不同细胞类型的细胞附着量最小。
一致的 3D 肿瘤细胞拟球体的形成
Nunclon Sphera 96 孔 U 型底 3D 细胞培养板上可以实现细胞可靠的生长,并且更易于控制球状体尺寸,这对于重视一致性和重现性的应用来说非常重要。3D 肿瘤细胞拟球体可以模仿体内实体肿瘤均匀生长及大型肿瘤的缺氧核心。
图 2.HCT 116 结肠癌细胞的生长动力学显示了即使初始接种密度低至 100 个细胞/孔,使用Nunclon Sphera 3D 细胞培养板,也能更早形成拟球体,。
图 3.HCT 116 3D 肿瘤细胞球状体的大小可以通过孔中的初始接种密度来控制。将 HCT 116 结肠癌细胞在 Nunclon Sphera 3D 细胞培养板上培养 112 个小时。
图 4.在 Nunclon Sphera 96 孔 U 型底 3D 细胞培养板上培养 2 天后,HeLa 肿瘤球状体中的缺氧核心,初始接种密度为 1000 个细胞/孔。在 Nunc 玻璃底皿上用 Invitrogen Image-iT Red Hypoxia 探针和 Invitrogen NucBlue Live ReadyProbe 试剂对 3D 肿瘤球状体进行染色。
3D 细胞培养应用
神经球和脑类器官的产生
神经干细胞(NSC)通过内源性分泌的天然 ECM 彼此聚集,导致神经球快速形成。通过特定的研究方案,神经球中一致的细胞生长可进一步分化成被称为具有组织特异性形态和功能的脑类器官多细胞结构。
图 5.在 在Nunclon Sphera 3D 细胞培养板上培养一周后,对人 iPSC 衍生的神经球进行成像并采用 DAPI 染色。
图 6.对在 使用 InvitrogenEVOS FL Auto 2 成像系统 以 10x 放大率成像对Nunclon Sphera 3D 细胞培养皿中培养的脑类器官进行免疫染色。
拟胚体的形成
胚胎干细胞(ESC)和诱导多功能干细胞(IPSC)形成 3D 聚集体,该聚合体称为拟胚体(EB),由粘附分子的复杂网络结合在一起。拟胚体内部的旁分泌信号对于胚胎的形成十分重要,该信号可以响应环境诱导并且决定三个胚层的最终分化。
图 8.如外胚层标志物 β-微管蛋白、内胚层标志物甲胎蛋白(AFP)和中胚层标志物平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达所示,人类 EB 在 Nunc Lab Tek II 室内载玻片上分化为三个胚层。用 DAPI 复染色。
药物研发中高通量筛选(HTS)使用的模型系统
新药开发的高失败率会给制药公司和消费者带来巨大的成本损耗,因此,用户有在药物开发过程的早期阶段获得更好的 3D 细胞模型的需求。在Nunclon Sphera 3D 细胞培养微孔板的孔中培养出具有均匀尺寸和处于中心位置的 3D 细胞拟球体和类器官,可以为药物研发和疾病建模提供一种极具吸引力且生物学相关性更好的的 3D 细胞模型系统,常被用于在高内涵筛选平台上进行高通量筛选。
图 9.Nunclon Sphera 96 孔 U 型底培养板中尺寸均匀且形状一致的 A549 人肺 3D 肿瘤球状体的明场图像。
图 10.使用 A549 和 HeLa 3D 肿瘤球状体在 Nunclon Sphera 96 孔 U 型底培养板上演示了氯硝柳胺诱导的线粒体膜去极化和凋亡。肿瘤球状体采用 MitoTracker Orange 和 CellEvent Green Caspase 3/7 进行染色。
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