准确、有效进行核酸定量对于分子生物学实验室来说至关重要,因为分子生物学实验室需要处理珍贵、稀有或难以处理的样品,以进行需要精确测量的分析下游应用。这些措施包括实时 PCR 分析,测量 RNA 制剂的产量,用于微阵列实验、逆转录 PCR(RT-PCR)、差异显示 PCR、northern 印迹分析、S1 核酸酶检测、RNase 保护检测和 cDNA 库制备。
dsDNA 检测
PicoGreen® 试剂检测试剂盒为准确定量 dsDNA 提供了一种快速、简单的荧光方法。这些检测试剂盒比常规紫外吸收法的灵敏度高很多,并且可以针对不同的浓度范围进行优化。PicoGreen® 试剂检测试剂盒通常用于等位基因特异性 PCR 的基因分型,在 PCR 扩增前后对 dsDNA 样品进行定量,并在测序前确定 PCR 扩增量。
ssDNA 检测
OliGreen® 试剂检测试剂盒为准确定量 ssDNA 提供了一种快速、简单的荧光方法。该检测试剂盒比常规紫外吸收法的灵敏度高许多,并且长达 6 个碱基的短寡核苷酸或游离核苷酸不会干扰 ssDNA 定量检测。OliGreen® 试剂检测试剂盒通常用于反义寡核苷酸、适配体、变性条件下分离的基因组 DNA、PCR 引物、测序引物和单链噬菌体 DNA。
RNA 检测
RiboGreen 试剂检测试剂盒为准确定量 RNA 提供了 一种快速、简单的荧光方法。RiboGreen 试剂不会检测到游离核苷酸对样品存在的污染,因此可以更准确地测量降解样品中的完整 RNA 量。RiboGreen 试剂尤其适于在生成 cDNA、进行 northern 印迹分析、S1 核酸酶检测、RNase 保护检测、逆转录 PCR 和差异显示 PCR 之前快速准确测量 RNA。
使用 PicoGreen dsDNA 定量试剂对 25 pg/mL-1,000 ng/mL 的小牛胸腺 DNA 进行线性定量。在 480 nm 处激发样品,在 520 nm 处测量荧光发射强度,并将其绘制为 DNA 浓度的函数。插图显示了 0-750 pg/mL DNA 浓度范围内获得的检测结果。
名称 | Quant-iT™ PicoGreen dsDNA 检测试剂盒 | Quant-iT™ DNA 检测试剂盒,高灵敏度 | Quant-iT™ dsDNA 检测试剂盒,宽检测范围 |
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靶标 | dsDNA | dsDNA | dsDNA |
标记染料 | PicoGreen | PicoGreen | PicoGreen |
Ex/Em (nm) | 502/523 | 502/523 | 502/523 |
样品 | 在 ssDNA、RNA 或游离核苷酸存在的情况下选择性地定量 dsDNA | 在 ssDNA、RNA 或游离核苷酸存在的情况下选择性地定量 dsDNA | 在 ssDNA、RNA 或游离核苷酸存在的情况下选择性地定量 dsDNA |
使用 | 检测下限为 250 pg/mL dsDNA(200 µL 检测体积中含 50 pg) | 检测下限为 200 µL 检测体积中含 0.2–100 ng DNA | 检测范围为 200 µL 检测体积中含 2-1,000 ng DNA |
组分 | 包含缓冲液和 DNA 标准品 | 包含缓冲液和 DNA 标准品 | 包含缓冲液和 DNA 标准品 |
规格 | 2,000 次检测,每次 200 µL | 1,000 次检测,采用 96 孔微孔板,检测体积为 200 µL | 1,000 次检测,采用 96 孔微孔板,检测体积为 200 µL |
实验方案概述 |
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货号 | P11496 | Q33120 | Q33130 |
Quant-iT™ OliGreen ssDNA 试剂 | Quant-iT™ OliGreen ssDNA 检测试剂盒 | |
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靶标 | ssDNA | ssDNA |
标记染料 | OliGreen | OliGreen |
Ex/Em (nm) | 500/525 | 500/525 |
样品 | 选择性地定量溶液中的寡核苷酸和单链 DNA(ssDNA) | 选择性地定量溶液中的寡核苷酸和单链 DNA(ssDNA) |
使用 | 在 200 µL 检测体积中检测 200 pg 至 2 µg ssDNA | 在 200 µL 检测体积中检测 200 pg 至 2 µg ssDNA |
组分 | 散装试剂 | 包含缓冲液和 DNA 标准品 |
检测规格 | 2,000 次检测,检测体积为 200 µL | 2,000 次检测,检测体积为 200 µL |
实验方案概述 |
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货号 | O7582 | O11492 |
Quant-iT™ RiboGreen RNA 检测试剂盒 | RediPlate™ 96 RiboGreen RNA 定量试剂盒 | |
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靶标 | RNA | RNA |
标记染料 | RiboGreen | RiboGreen |
Ex/Em (nm) | 500/525 | 500/525 |
检测 | 选择性地定量溶液中的 RNA | 选择性地定量溶液中的 RNA |
使用 | 检测范围 1–200 ng RNA | 检测范围 3–200 ng RNA |
组分 | 试剂盒包含试剂、缓冲液和 RNA 标准品 | 预分装在 96 孔板中 |
规格 | 2,000–20,000 次微孔板检测,样品体积为 200 µL | 96 次检测 |
实验方案概述 |
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货号 | R11490 | R32700 |
名称 | Quant-iT™ PicoGreen dsDNA 检测试剂盒 | Quant-iT™ DNA 检测试剂盒,高灵敏度 | Quant-iT™ dsDNA 检测试剂盒,宽检测范围 |
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靶标 | dsDNA | dsDNA | dsDNA |
标记染料 | PicoGreen | PicoGreen | PicoGreen |
Ex/Em (nm) | 502/523 | 502/523 | 502/523 |
样品 | 在 ssDNA、RNA 或游离核苷酸存在的情况下选择性地定量 dsDNA | 在 ssDNA、RNA 或游离核苷酸存在的情况下选择性地定量 dsDNA | 在 ssDNA、RNA 或游离核苷酸存在的情况下选择性地定量 dsDNA |
使用 | 检测下限为 250 pg/mL dsDNA(200 µL 检测体积中含 50 pg) | 检测下限为 200 µL 检测体积中含 0.2–100 ng DNA | 检测范围为 200 µL 检测体积中含 2-1,000 ng DNA |
组分 | 包含缓冲液和 DNA 标准品 | 包含缓冲液和 DNA 标准品 | 包含缓冲液和 DNA 标准品 |
规格 | 2,000 次检测,每次 200 µL | 1,000 次检测,采用 96 孔微孔板,检测体积为 200 µL | 1,000 次检测,采用 96 孔微孔板,检测体积为 200 µL |
实验方案概述 |
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货号 | P11496 | Q33120 | Q33130 |
Quant-iT™ OliGreen ssDNA 试剂 | Quant-iT™ OliGreen ssDNA 检测试剂盒 | |
---|---|---|
靶标 | ssDNA | ssDNA |
标记染料 | OliGreen | OliGreen |
Ex/Em (nm) | 500/525 | 500/525 |
样品 | 选择性地定量溶液中的寡核苷酸和单链 DNA(ssDNA) | 选择性地定量溶液中的寡核苷酸和单链 DNA(ssDNA) |
使用 | 在 200 µL 检测体积中检测 200 pg 至 2 µg ssDNA | 在 200 µL 检测体积中检测 200 pg 至 2 µg ssDNA |
组分 | 散装试剂 | 包含缓冲液和 DNA 标准品 |
检测规格 | 2,000 次检测,检测体积为 200 µL | 2,000 次检测,检测体积为 200 µL |
实验方案概述 |
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货号 | O7582 | O11492 |
Quant-iT™ RiboGreen RNA 检测试剂盒 | RediPlate™ 96 RiboGreen RNA 定量试剂盒 | |
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靶标 | RNA | RNA |
标记染料 | RiboGreen | RiboGreen |
Ex/Em (nm) | 500/525 | 500/525 |
检测 | 选择性地定量溶液中的 RNA | 选择性地定量溶液中的 RNA |
使用 | 检测范围 1–200 ng RNA | 检测范围 3–200 ng RNA |
组分 | 试剂盒包含试剂、缓冲液和 RNA 标准品 | 预分装在 96 孔板中 |
规格 | 2,000–20,000 次微孔板检测,样品体积为 200 µL | 96 次检测 |
实验方案概述 |
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货号 | R11490 | R32700 |
使用 Thermo Scientific 微孔板读数仪熟练进行荧光检测
使用 Invitrogen 荧光试剂可在 Fluoroskan 或 Fluoroskan FL 荧光微孔板读数仪或 Varioskan LUX 多功能微孔板读数仪上快速高灵敏度荧光检测 96-1,536 份样品,获得最佳检测效果。利用自动动态范围选择,为每个单独的孔提供最佳的增益设置,并实现更高的通量。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。