EdU细胞增殖检测方法—更出色的BrdU细胞增殖检测替代方法-赛默飞

更出色的EdU细胞增殖检测方法-代替您繁琐的BrdU细胞增殖检测法

Invitrogen Click-iT EdU细胞增殖分析试剂采用Click-iT化学技术，可为新合成的DNA检测与定量提供比传统BrdU细胞增殖检测方法更优秀的替代物。当在DNA合成过程中掺入修饰的核苷EdU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷）时，可以通过快速的“Click-iT化学”反应检测到它，并且对细胞的破坏作用最小。

Click-iT EdU技术

Click-iT EdU检测技术相比于BrdU具有更简便、更快速、更易操作的优点。与使用溴脱氧尿苷(BrdU)检测法不同，Click-iT EdU检测法不是基于抗体，因此并不需要DNA变性以检测掺入的核苷。此外，Click-iT EdU可以与R-PE、R-PE tandems 和GFP等荧光蛋白复用提高效力。当您平行比较这些方法时，Click-iT EdU和Invitrogen Click-iT Plus EdU在测定细胞增殖方面的优势是显而易见的。（表格1）。

Click-iT EdU技术优势：

快速—检测时间低至60分钟。
准确—没有抗体和变性步骤产生的假信号。
精简—简单六步方案。

Click-iT Plus EdU试剂盒优势：

支持多色检测—可与R-PE（和双联体）及荧光蛋白兼容。

表1. Click-iT EdU、Click-it Plus EdU和BrdU检测法比较。

	Click-iT EdU试剂盒	Click-iT Plus EdU试剂盒	BrdU
多重	与大多数标准荧光染料（不包括FP和双联体）联用	与所有标准荧光染料（包括GFP和其他FP及敏感的双联体）联用	可变的
基础实验所需的试剂	Click-iT EdU或Click-iT Plus EdU流式细胞检测试剂盒 FIX & PERM 固定和破膜试剂盒		BrdU FIX & PERM固定和破膜试剂盒 Alexa Fluor 488抗-BrdU 抗体 DNase 7-AAD
出结果时间（标记+检测）	通常 < 90分钟		5小时至过夜
步骤数	6 （无需多个破膜步骤，不需要 Dnase 处理）		~10
DNA变性	无		需要

	Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 流式试剂盒	Click-iT Plus EdU Pacific Blue 流式试剂盒	Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式试剂盒		Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 流式试剂盒	Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647流式试剂盒
检测基本原理	作为传统BrdU检测的替代方法，将修饰的胸苷类似物EdU掺入增殖细胞中新合成的DNA中。使用明亮且光稳定的Invitrogen Alexa Fluor染料，通过快速、高度特异性的点击反应标记细胞。
多重	Click-iT EdU Plus试剂盒具有最大限度的多色检测性能。温和的点击化学方案不会破坏细胞表位（与BrdU方案不同）并且与标准抗体标记（小分子有机染料，如 FITC 或 Alexa Fluor染料，以及敏感的双联体，例如 Invitrogen R-PE-Cy5或APC-Cy7），荧光蛋白和常见的细胞染色方法兼容。
读取	荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。
荧光标记	Alexa Fluor 350 吡啶甲基叠氮化物	Pacific Blue 吡啶甲基叠氮化物	Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物		Alexa Fluor 594 吡啶甲基叠氮化物	Alexa Fluor 647 吡啶甲基叠氮化物
激光(nm)	UV	405	488		532 或 561	633/635
Ex/Em (nm)	350/438	410/455	495/519		532 或 561/615	650/668
样品类型	针对活细胞进行了优化，固定之后进行点击检测步骤。
参考文献	引用文献
产品规格	50 个反应	50 个反应	50 个反应	100 个反应	50 个反应	50 个反应	100 个反应
货号	C10645	C10636	C10632	C10633	C10646	C10634	C10635

	Click-iT EdU Pacific Blue流式细胞分析试剂盒	Click-iT EdU Alexa Fluor 488流式细胞分析试剂盒		Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒
检测基本原理	标准的Click-iT EdU 试剂盒兼容性有限；它们与有机染料标签（如FITC或Alexa Fluor染料）兼容，但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白（R-PE）和基于R-PE的双联体（即R-PE-Cy5结合物）不兼容。
多重	标准的Click-iT EdU试剂盒兼容性有限；它们与有机染料标签（如FITC 或 Alexa Fluor 染料）兼容，但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白（R-PE）和基于R-PE的双联体（即R-PE-Cy5结合物）不兼容。若想与荧光蛋白和基于 APC 和 R-PE 的灵敏双联体兼容，我们建议使用 Click-iT EdU Plus 流式细胞分析试剂盒。
读取	荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。
荧光标记	Pacific Blue 叠氮化物	Alexa Fluor 488 叠氮化物		Alexa Fluor 647 叠氮化物
激光器	405 nm	488 nm		633/635 nm
Ex/Em (nm)	410/455	495/519		650/668
样品类型	针对活细胞进行了优化，固定之后进行点击检测步骤。
参考文献	引用文献
产品规格	50 个反应	50 个反应	100 个反应	50个反应	100 个反应
货号	C10418	C10424	C10420	C10425	C10419

Click-iT Plus EdU 试剂盒

	Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 流式试剂盒	Click-iT Plus EdU Pacific Blue 流式试剂盒	Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式试剂盒		Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 流式试剂盒	Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647流式试剂盒
检测基本原理	作为传统BrdU检测的替代方法，将修饰的胸苷类似物EdU掺入增殖细胞中新合成的DNA中。使用明亮且光稳定的Invitrogen Alexa Fluor染料，通过快速、高度特异性的点击反应标记细胞。
多重	Click-iT EdU Plus试剂盒具有最大限度的多色检测性能。温和的点击化学方案不会破坏细胞表位（与BrdU方案不同）并且与标准抗体标记（小分子有机染料，如 FITC 或 Alexa Fluor染料，以及敏感的双联体，例如 Invitrogen R-PE-Cy5或APC-Cy7），荧光蛋白和常见的细胞染色方法兼容。
读取	荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。
荧光标记	Alexa Fluor 350 吡啶甲基叠氮化物	Pacific Blue 吡啶甲基叠氮化物	Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物		Alexa Fluor 594 吡啶甲基叠氮化物	Alexa Fluor 647 吡啶甲基叠氮化物
激光(nm)	UV	405	488		532 或 561	633/635
Ex/Em (nm)	350/438	410/455	495/519		532 或 561/615	650/668
样品类型	针对活细胞进行了优化，固定之后进行点击检测步骤。
参考文献	引用文献
产品规格	50 个反应	50 个反应	50 个反应	100 个反应	50 个反应	50 个反应	100 个反应
货号	C10645	C10636	C10632	C10633	C10646	C10634	C10635

Click-iT EdU 试剂盒

	Click-iT EdU Pacific Blue流式细胞分析试剂盒	Click-iT EdU Alexa Fluor 488流式细胞分析试剂盒		Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒
检测基本原理	标准的Click-iT EdU 试剂盒兼容性有限；它们与有机染料标签（如FITC或Alexa Fluor染料）兼容，但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白（R-PE）和基于R-PE的双联体（即R-PE-Cy5结合物）不兼容。
多重	标准的Click-iT EdU试剂盒兼容性有限；它们与有机染料标签（如FITC 或 Alexa Fluor 染料）兼容，但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白（R-PE）和基于R-PE的双联体（即R-PE-Cy5结合物）不兼容。若想与荧光蛋白和基于 APC 和 R-PE 的灵敏双联体兼容，我们建议使用 Click-iT EdU Plus 流式细胞分析试剂盒。
读取	荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。
荧光标记	Pacific Blue 叠氮化物	Alexa Fluor 488 叠氮化物		Alexa Fluor 647 叠氮化物
激光器	405 nm	488 nm		633/635 nm
Ex/Em (nm)	410/455	495/519		650/668
样品类型	针对活细胞进行了优化，固定之后进行点击检测步骤。
参考文献	引用文献
产品规格	50 个反应	50 个反应	100 个反应	50个反应	100 个反应
货号	C10418	C10424	C10420	C10425	C10419

Click-iT EdU 流式细胞分析试剂盒背后的科学知识

Click-iT EdU 技术的优势在于化学方面 - 独特的小分子和低背景的标记物以及检测基团之间特异性共价反应。 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）是含有炔烃的核苷类似物。在铜催化反应中，炔与染料标记的叠氮化物反应，形成稳定的共价键。小分子的叠氮化物试剂可以有效地接触DNA而无需对细胞进行破坏处理。这样大大地简化了测定，获得的结果与使用传统的BrdU相似（或更好）（图1和图2）。

图1：使用 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式细胞检测试剂盒和FxCycle Violet 染色剂进行细胞增殖分析。 根据 Invitrogen Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488流式细胞检测试剂盒操作步骤，用 10 μM EdU 处理 Jurkat 细胞1小时并用 Invitrogen Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物染色，然后用Invitrogen Violet 染色剂染色。使用 488 nm （Click-iT EdU Alexa Fluor 488 染色剂）或 405 488 nm （对于FxCycle Violet 染色剂）激发波长，通过流式细胞术分析细胞。 (A) 显示S期细胞（DNA合成、包括 EdU 掺入）和G2/M或G0/G1细胞明显分离的直方图。 (B) 显示使用 FxCycle Violet 染色剂时的 DNA 含量分布直方图，G₀/G₁ 和 G₂/M 期峰由 S 期分割。 (C) 显示共阳性细胞的双参数 Click-iT Plus EdU 和 FxCycle 图，直接测量S期细胞百分比。

图 2. 使用mCherry荧光蛋白和 FxCycle Far Red染色剂进行 Alexa Fluor 488 Click-iT Plus EdU标记。 将表达mCherry的A549细胞使用10 µM EdU处理2小时，并按照推荐的染色方案检测。 图 A 为用 Alexa Fluor 488吡啶叠氮化物标记的细胞的直方图，用于鉴定S期细胞。 图 B 和 C 分别为存在（图B）和不存在铜时（图C）的Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 吡啶叠氮化物标记细胞发出的mCherry荧光，证明在点击反应中mCherry荧光保留。 图 D 为 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 和 Invitrogen FxCycle Far Red染色剂染色的DNA含量双参数图；共阳性的细胞处于S期。