일시적으로 transfection된 현탁 배양에서 빠르고, 확장 가능한 고수율 단백질 생성.
- CHO 및 293 현탁 배양에 최적화된 발현 시스템
- 포유류 이행 후 변형이 포함된 기능 단백질
- 무혈청 및 동물 유래 성분이 없는 성분을 사용한 쉬운 확장 및 정제
CHO 또는 293 세포용 FreeStyle™ MAX System
The FreeStyle MAX System is a breakthrough protein production technology for easily scalable, rapid generation of posttranslationally modified, functional proteins in Chinese Hamster Ovary (CHO) or human embryonic kidney (HEK) 293 cells. The cells are adapted to suspension growth in FreeStyle CHO or FreeStyle 293 Expression media, which provide an optimal balance in supporting high cell growth and maximal transfection efficiency. Transient transfection of either cell line is accomplished using the new high-efficiency FreeStyle MAX Reagent.
The choice of either CHO or 293 cells allows greater flexibility to use the most appropriate cell line to produce your recombinant protein of interest. The FreeStyle MAX System for CHO cells reliably produces milligram quantities of human IgG and other proteins (Table 1), and provides an advanced alternative to transient 293 expression systems and conventional stable cell line generation (Figure 1).
The FreeStyle MAX Expression System kits include FreeStyle MAX Reagent, Gibco FreeStyle Expression Media, FreeStyle CHO or 293 cells , and OptiPRO SFM. You can also purchase the system components separately. The media and transfection reagent components of the FreeStyle MAX System are animal origin free and protein free.
FreeStyle™ MAX System은 CHO(Chinese Hamster Ovary) 또는 HEK(human embryonic kidney) 293 세포에서 이행 후 변형된 기능 단백질을 쉽게 확장하고 빠르게 생성할 수 있는 획기적인 단백질 생성 기술입니다. 이 세포는 FreeStyle™ CHO 또는 FreeStyle™ 293 Expression 배지에서 현탁액 성장에 맞게 조정되고, 높은 세포 성장 지원과 transfection 효율 극대화 간의 균형을 최적으로 맞춰줍니다. 어느 세포주에서든 일시적 transfection은 새로운 고효율 FreeStyle™ MAX Reagent를 사용해 실시됩니다.
CHO 또는 293 세포를 선택하면 활용도가 높아져 가장 적합한 세포주를 사용해 타깃 재조합 단백질을 생성할 수 있습니다. CHO 세포용 FreeStyle™ MAX System은 mg 분량의 휴먼 IgG 및 기타 단백질(표 1)을 안정적으로 생성하고, 일시적 293 발현 시스템과 기존 안정 세포주 생성의 우수한 대안이 됩니다(그림 1 확인하려면 축소판 그림 이미지 클릭).
FreeStyle™ MAX Expression System 키트에는 FreeStyle™ MAX Reagent, GIBCO® FreeStyle™ Expression Media, FreeStyle™ CHO 또는 293 세포, OptiPRO™ SFM이 들어 있습니다. 또한 시스템 구성품을 별도로 구입할 수도 있습니다. FreeStyle™ MAX System의 배지와 transfection 시약 성분에는 동물 유래 성분과 단백질이 없습니다.
표 1. High protein yield in FreeStyle™ MAX CHO 현탁 세포에서 높은 단백질 수율
| 단백질 | Day 1 | Day 2 | Day 3 | Day 4 | Day 5 | Day 6 |
|---|
| 휴먼 IgG | 6 | 18 | 28 | 36 | 42 | 47 |
| Factor IX | 0.7 | 1.6 | 2.2 | 2.0 | 2.3 | 2.2 |
| HGH | 50 | 109 | 178 | 214 | 225 | 243 |
| EPO | 2.3 | 6.5 | 7.4 | 8.5 | 8.8 | 8.9 |
휴먼 IgG, Factor IX, 휴먼 성장 호르몬(HGH), erythropoietin(EPO)은 FreeStyle™ CHO-S 세포에서 생성되었습니다. 세포는 125ml 쉐이커 플라스크를 사용해 30ml의 FreeStyle™ CHO Expression Medium에서 1 x 10 6 cells/ml 의 밀도로 배양되었습니다. transfection할 배양 용적 ml당 1.25μg의 플라스미드 DNA와 1.25μl의 FreeStyle™ MAX Reagent를 사용해 OptiPRO™ SFM에서 transfection 복합체를 형성했습니다. transfection 24시간 후, GFP 발현으로 측정한 transfection 효율은 60%였습니다. 단백질 생성은 ELISA를 통해 mg/L 단위로 측정되었습니다.
293 세포용 FreeStyle™ 293 System
쉽게 확장 가능하고, 빠른 단백질 생성을 위한 FreeStyle™ 293 System은 휴먼 HEK293에서 세포 이행 후 변형된 기능 단백질을 생성합니다. 이 시스템은 재조합 항체 단백질의 일시적 발현에서 우수한 생산성과 속도를 자랑합니다(표 2). 고효율 293fectin™ transfection 시약을 사용해 Transfection을 실시합니다. transfection 프로토콜은 동등한 용적의 단백질 수율을 유지하면서도 현탁 배양 용적 30ml부터 10L 이상까지 변형을 최소화하거나 전혀 변형 없이 쉽게 확장 가능합니다(그림 3).
FreeStyle™ 293 System 키트에는 293fectin™ transfection 시약, GIBCO® FreeStyle™293 Expression Media, FreeStyle™ 293 세포, Opti-MEM® I 배지가 들어 있습니다. 또한 시스템 구성품을 별도로 구입할 수도 있습니다.
표 2. 293fectin™ 시약을 사용한 FreeStyle™ 293 현탁 세포에서의 높은 단백질 수율.
| 단백질 | Day 1 | Day 2 | Day 3 | Day 4 | Day 5 | Day 6 |
|---|
| 휴먼 IgG | 12 | 63 | 99 | 128 | 159 | 164 |
| Factor IX | 0.34 | 0.73 | 0.92 | 0.98 | 1.0 | 1.1 |
| HGH | 19 | 150 | 67 | 143 | 163 | 181 |
| EPO | 0.03 | 0.05 | 0.08 | 0.1 | 0.11 | 0.14 |
휴먼 IgG, Factor IX, 휴먼 성장 호르몬(HGH), erythropoietin(EPO)은 FreeStyle™ 293-F 세포에서 생성되었습니다. 세포는 125ml 쉐이커 플라스크를 사용해 30ml의 FreeStyle™ 293 Expression Medium에서 1 x 106 cells/ml 의 밀도로 배양되었습니다. transfection할 배양 용적 ml당 1.0μg의 플라스미드 DNA와 2.0μl의 293FreeStyle™ MAX Reagent를 사용해 OptiPRO™ SFM 또는 Opti-MEM® I 배지에서 transfection 복합체를 형성했습니다. transfection 24시간 후, GFP 발현으로 측정한 transfection 효율은 75% 이상이었습니다. 단백질 생성은 ELISA를 통해 mg/L 단위로 측정되었습니다.
편의성과 속도
현탁 배양에서 포유류 세포의 대규모 일시적 transfection은 기능, 치료, 구조 연구를 위한 mg 분량의 포유류 재조합 단백질을 빠르고 안정적으로 생성합니다. FreeStyle™ MAX 및 FreeStyle™ 293 System에서는 멸균 작업대, CO2 배양기, spinner culture 또는 진탕 플라스크를 사용한 플랫폼 쉐이커만이 필요합니다. 안정적인 세포주 개발에는 높게 발현되는 클론을 확인하기 위한 수작업이 많은 스크리닝과 조정 절차가 필요합니다.
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크게 보려면 이미지를 클릭하세요 | | 전체 공정은 안정적으로 transfection된 세포주의 첫 선택부터 최종 산물 생성에 이르기까지 수 개월이 소요됩니다. 비교해 볼 때 FreeStyle™ System은 단 몇 일만에 대규모 단백질 생산이 가능하고 30ml에서 10L 배양까지 쉽게 확장 가능합니다(그림 2 및 3 확인하려면 축소판 그림 이미지 클릭). 확장을 위한 세부 프로토콜도 여기에 나와 있습니다. |
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| | The overall process requires months from the initial selection of a stably transfected cell line to production of final product. In comparison, the FreeStyle System achieve large-scale protein production in days, and is easily scalable from 30 ml to 10 L cultures (Figure 2 & 3). Detailed protocols for scale-up are available at here. |
단백질 생성 서비스
FreeStyle™ Custom Service를 이용해 요청한 규모를 기준으로 현탁 CHO 또는 293 시스템에서 최적화된 조건으로 단백질을 생성할 수 있습니다. 또한, 시간 경과(timecourse) 연구와 1–50L 배양에서의 단백질 생성이 제공됩니다. 그 외에, 세포 팰릿이 제공되고, 더 좋은 점은 최종 제공물로서 정체 단백질이 제공됩니다. Invitrogen 영업 담당자에게 연락하여 필요한 사항에 대해 상의하고 프로젝트를 시작하십시오.
Journal Publication from HighWire Press
16447100,16447500,k900020,k900010,12347019,12347500,12338018,12338026,12651014,12651022
본 제품은 연구용으로만 사용 가능합니다. 진단 절차에 사용할 수 없습니다.
