Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的蛋白免疫印迹显示干净、清晰，仅对应于全长蛋白质的蛋白信号，而 Bio-Rad TGX 预制胶的蛋白免疫印迹显示多种低分子量降解产物。在 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶和 Bio-Rad TGX tris-甘氨酸预制胶上分析了与癌症有关的蛋白激酶（IKKϐ、EPHB3、HCK、MAPK14、FLT1 和 DDR2）。将纯化的激酶（每种 50 ng），MagicMark 蛋白标准品和纯化的重组 GST 蛋白加载到 10 孔，4-12％ Bolt 预制胶和 10 孔，4-20％ Bio-Rad TGX 预制胶上。分离样品并按照各自制造商的规程转移到 0.45-μm PVDF 膜上。使用抗 GST 抗体和 WesternBreeze 化学发光检测进行免疫检测。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶是预制的聚丙烯酰胺凝胶，旨在在变性条件下为各种分子量蛋白提供最佳分离。Bolt Bis-Tris Plus 预制胶旨在在中性 pH 环境中提供一致的凝胶性能，从而最大程度地减少蛋白质修饰。因此，在下游转印和蛋白质印迹分析以及任何其他蛋白质完整性至关重要的技术之前，Bolt 预制胶是一个不错的选择。
Bolt Bis-Tris 预制胶规格
| 可选凝胶尺寸 | 小型胶：8 cm x 8 cm (1.0 mm 厚) |
| 储存条件 | 室温 |
| 有效期 | 16 个月 |
| 推荐的上样缓冲液 | Bolt LDS 上样缓冲液 |
| 推荐的电泳缓冲液 | Bolt MES SDS 或 Bolt MOPS SDS 电泳缓冲液 |
| 推荐的转印缓冲液 | Bolt 转印缓冲液 |
| 凝胶体系 | Bis-Tris 体系 |
| 可选凝胶浓度 | 8%、10%、12% 和 4–12% |
| 分离范围（变性） | 14 kDA 至 260 kDa （MOPS 缓冲液） 2 kDA 至 200 kDa （MES 缓冲液） |
| 与小型胶配套的电泳槽（设备） | 小型胶电泳槽 或 XCell SureLock Mini-Cell 电泳槽 |
| 分离方式 | 根据分子量分离蛋白质 |
| 应用 | SDS-PAGE |
| 孔类型 | 1D，Invitrogen 楔形孔形式（每孔上样量高达 60 µL） |
高容量孔- 楔形孔
每个 Bolt 预制胶内独特的楔形孔可提供更高的上样量，因此您可以在每个孔中加载多达两倍的蛋白质样品。
| 孔尺寸 | 推荐上样体积 | 最大上样体积 | 最高蛋白上样量 |
|---|---|---|---|
| 10-孔 | 40 µL | 60 µL | 0.5 µg/条带 |
| 12-孔 | 30 µL | 45 µL | 0.4 µg/条带 |
| 15-孔 | 20 µL | 35 µL | 0.25 µg/条带 |
| 17-孔 | 15 µL | 30 µL | 0.2 µg/条带 |
即使在稀释样品中也可以检测蛋白质，或者测量低丰度蛋白质的表达。有了更多的上样空间，您不再需要担心样品溢出和蛋白质印迹上的孔间污染。无需使用特殊的凝胶加载移液器吸头，凝胶加载也更加容易。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的高样品容量。(A) 在 Invitrogen Bolt 4–12% Bis-Tris Plus 10 孔预制胶的其他每条泳道中，装入体积逐渐增加的荧光蛋白标准品（40 μL–70 μL）。(B) 在 Bio-Rad 的 4–20% 10 孔预制胶的其他每条泳道中，装入相同的蛋白标准品（10 μL–40 μL）。样品溢出和孔间污染被视作来自相邻孔中样品的信号。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶是使用 bis-tris 不连续缓冲系统的预制聚丙烯酰胺凝胶。Bis-Tris 预制胶缓冲系统将蛋白质保持在中性 pH 值环境中，该环境通过最小化蛋白质修饰来保持蛋白质完整性。因此，在下游转印和蛋白质印迹分析以及任何其他蛋白质完整性至关重要的技术之前，Bolt 预制胶是一个不错的选择。
Bis-Tris Plus 预制胶的特点和优势：
- 中性 pH 环境– 有助于预防蛋白修饰
- 高容量孔– 楔形孔使上样变得更容易（无需专门的移液器吸头），并允许加载高达两倍的样品量。
- 保质期更长— 凝胶可以在 4-25 °C 下储存 16 个月
- 快速电泳– 在大约 22-35 分钟内分离蛋白
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶被配制用于变性凝胶电泳应用。为了获得最佳样品前处理，使用包含 SDS 的缓冲液。可以使用 MES SDS 电泳缓冲液运行凝胶，更好地分离较小的蛋白质（1-200 kDa），使用 MOPS SDS 电泳缓冲液运行凝胶，以分离中到大尺寸蛋白质（14-260 kDa）。
Bis-Tris 不连续缓冲系统：
- 氯离子 (–) 来自凝胶缓冲液，并因其相对于体系中其他阴离子与阳极之间有更强的亲和力而作为前导离子。凝胶缓冲液离子有 bis-tris (+) 和 Cl (–) (pH 6.4)。
- MES 或 MOPS(–) 在电泳缓冲液中充当尾随离子。电泳缓冲液离子有 tris (+)、MOPS/MES (–) 以及十二烷基硫酸盐 (pH 7.3–7.7)。
- Bis-tris (+) 是凝胶缓冲液和电泳缓冲液中常见的离子。较低 pH 的凝胶缓冲液（pH 6.4）和电泳缓冲液（pH 7.3–7.7）的组合会导致电泳期间 7 的运行 pH 值大大降低。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的优化性能
与传统的 tris-甘氨酸预制胶不同，Bolt Bis-Tris Plus 预制胶采用 bis-tris HCl 缓冲（pH 6.4），工作 pH 约为 7.0。这种中性 pH 值加上独特，温和的样品制备方案，意味着您的蛋白质样品始终驻留在温和的非酸性条件下，从而保留了蛋白质的完整性并最大程度地减少了蛋白质修饰。这有助于确保每次都具有高灵敏，准确的蛋白质印迹结果。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的更高灵敏度。使用 iBlot 2 转印设备，将 A431 细胞的总细胞提取物从 4–12% 的 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶和 4-20% 的 Tris-甘氨酸预制胶上转印到 NC 和 PVDF 膜上。用 100 ng/mL 人表皮生长因子（hEGF）处理细胞，以上调磷酸 EGF 受体的表达。细胞提取物的蛋白质负载量范围从 20 μg 到 1.2 μg。印迹在 iBind 蛋白免疫印迹处理系统上进行，使用磷酸化 EGF 受体（Tyr1068）(1H12) 小鼠单克隆抗体（Cell Signaling 技术）的 1:200 稀释液和抗小鼠 HRP 二抗的 1:2,000 稀释液。
条带完整性
Bolt 预制胶可通过中性 pH 凝胶化学来保持蛋白质完整性。这种配方使电泳过程中的蛋白质修饰最小化。
条带分辨率
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶相比 Bio-Rad 预制胶可提供更高分辨率。通过高出 10% 的分辨距离，优化的凝胶化学和梯度格式，您可以在Bolt 预制胶上看到更多的蛋白条带。在实验分析中，您可以看到胰岛素 B 链和胰岛素 A 链的两个单独的条带，它们具有相似的分子量。Bolt 预制胶上的蛋白质条带看起来很直，甚至整个条带上的信号强度都很均匀，而 Bio-Rad 预制胶上的蛋白质条带不均匀且质量很差。
Bolt Bis-Tris 预制胶条带分辨率—Bio-Rad 染色蛋白预制胶的比较。(A) 使用 Invitrogen SimplyBlue SafeStain 染色 Bolt Bis-Tris 梯度预制胶。(B) 使用竞争对手的染色剂染色 Bio-Rad 的 tris-甘氨酸梯度预制胶。(C) 放大两种预制胶的泳道 5 截面，显示胰岛素 B 链（3.5 kDa）和胰岛素 A 链（2.5 kDa）。
Bolt Bis-Tris 预制胶规格
| 可选凝胶尺寸 | 小型胶：8 cm x 8 cm (1.0 mm 厚) |
| 储存条件 | 室温 |
| 有效期 | 16 个月 |
| 推荐的上样缓冲液 | Bolt LDS 上样缓冲液 |
| 推荐的电泳缓冲液 | Bolt MES SDS 或 Bolt MOPS SDS 电泳缓冲液 |
| 推荐的转印缓冲液 | Bolt 转印缓冲液 |
| 凝胶体系 | Bis-Tris 体系 |
| 可选凝胶浓度 | 8%、10%、12% 和 4–12% |
| 分离范围（变性） | 14 kDA 至 260 kDa （MOPS 缓冲液） 2 kDA 至 200 kDa （MES 缓冲液） |
| 与小型胶配套的电泳槽（设备） | 小型胶电泳槽 或 XCell SureLock Mini-Cell 电泳槽 |
| 分离方式 | 根据分子量分离蛋白质 |
| 应用 | SDS-PAGE |
| 孔类型 | 1D，Invitrogen 楔形孔形式（每孔上样量高达 60 µL） |
高容量孔- 楔形孔
每个 Bolt 预制胶内独特的楔形孔可提供更高的上样量，因此您可以在每个孔中加载多达两倍的蛋白质样品。
| 孔尺寸 | 推荐上样体积 | 最大上样体积 | 最高蛋白上样量 |
|---|---|---|---|
| 10-孔 | 40 µL | 60 µL | 0.5 µg/条带 |
| 12-孔 | 30 µL | 45 µL | 0.4 µg/条带 |
| 15-孔 | 20 µL | 35 µL | 0.25 µg/条带 |
| 17-孔 | 15 µL | 30 µL | 0.2 µg/条带 |
即使在稀释样品中也可以检测蛋白质，或者测量低丰度蛋白质的表达。有了更多的上样空间，您不再需要担心样品溢出和蛋白质印迹上的孔间污染。无需使用特殊的凝胶加载移液器吸头，凝胶加载也更加容易。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的高样品容量。(A) 在 Invitrogen Bolt 4–12% Bis-Tris Plus 10 孔预制胶的其他每条泳道中，装入体积逐渐增加的荧光蛋白标准品（40 μL–70 μL）。(B) 在 Bio-Rad 的 4–20% 10 孔预制胶的其他每条泳道中，装入相同的蛋白标准品（10 μL–40 μL）。样品溢出和孔间污染被视作来自相邻孔中样品的信号。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶是使用 bis-tris 不连续缓冲系统的预制聚丙烯酰胺凝胶。Bis-Tris 预制胶缓冲系统将蛋白质保持在中性 pH 值环境中，该环境通过最小化蛋白质修饰来保持蛋白质完整性。因此，在下游转印和蛋白质印迹分析以及任何其他蛋白质完整性至关重要的技术之前，Bolt 预制胶是一个不错的选择。
Bis-Tris Plus 预制胶的特点和优势：
- 中性 pH 环境– 有助于预防蛋白修饰
- 高容量孔– 楔形孔使上样变得更容易（无需专门的移液器吸头），并允许加载高达两倍的样品量。
- 保质期更长— 凝胶可以在 4-25 °C 下储存 16 个月
- 快速电泳– 在大约 22-35 分钟内分离蛋白
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶被配制用于变性凝胶电泳应用。为了获得最佳样品前处理，使用包含 SDS 的缓冲液。可以使用 MES SDS 电泳缓冲液运行凝胶，更好地分离较小的蛋白质（1-200 kDa），使用 MOPS SDS 电泳缓冲液运行凝胶，以分离中到大尺寸蛋白质（14-260 kDa）。
Bis-Tris 不连续缓冲系统：
- 氯离子 (–) 来自凝胶缓冲液，并因其相对于体系中其他阴离子与阳极之间有更强的亲和力而作为前导离子。凝胶缓冲液离子有 bis-tris (+) 和 Cl (–) (pH 6.4)。
- MES 或 MOPS(–) 在电泳缓冲液中充当尾随离子。电泳缓冲液离子有 tris (+)、MOPS/MES (–) 以及十二烷基硫酸盐 (pH 7.3–7.7)。
- Bis-tris (+) 是凝胶缓冲液和电泳缓冲液中常见的离子。较低 pH 的凝胶缓冲液（pH 6.4）和电泳缓冲液（pH 7.3–7.7）的组合会导致电泳期间 7 的运行 pH 值大大降低。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的优化性能
与传统的 tris-甘氨酸预制胶不同，Bolt Bis-Tris Plus 预制胶采用 bis-tris HCl 缓冲（pH 6.4），工作 pH 约为 7.0。这种中性 pH 值加上独特，温和的样品制备方案，意味着您的蛋白质样品始终驻留在温和的非酸性条件下，从而保留了蛋白质的完整性并最大程度地减少了蛋白质修饰。这有助于确保每次都具有高灵敏，准确的蛋白质印迹结果。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的更高灵敏度。使用 iBlot 2 转印设备，将 A431 细胞的总细胞提取物从 4–12% 的 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶和 4-20% 的 Tris-甘氨酸预制胶上转印到 NC 和 PVDF 膜上。用 100 ng/mL 人表皮生长因子（hEGF）处理细胞，以上调磷酸 EGF 受体的表达。细胞提取物的蛋白质负载量范围从 20 μg 到 1.2 μg。印迹在 iBind 蛋白免疫印迹处理系统上进行，使用磷酸化 EGF 受体（Tyr1068）(1H12) 小鼠单克隆抗体（Cell Signaling 技术）的 1:200 稀释液和抗小鼠 HRP 二抗的 1:2,000 稀释液。
条带完整性
Bolt 预制胶可通过中性 pH 凝胶化学来保持蛋白质完整性。这种配方使电泳过程中的蛋白质修饰最小化。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的蛋白免疫印迹显示干净、清晰，仅对应于全长蛋白质的蛋白信号，而 Bio-Rad TGX 预制胶的蛋白免疫印迹显示多种低分子量降解产物。在 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶和 Bio-Rad TGX tris-甘氨酸预制胶上分析了与癌症有关的蛋白激酶（IKKϐ、EPHB3、HCK、MAPK14、FLT1 和 DDR2）。将纯化的激酶（每种 50 ng），MagicMark 蛋白标准品和纯化的重组 GST 蛋白加载到 10 孔，4-12％ Bolt 预制胶和 10 孔，4-20％ Bio-Rad TGX 预制胶上。分离样品并按照各自制造商的规程转移到 0.45-μm PVDF 膜上。使用抗 GST 抗体和 WesternBreeze 化学发光检测进行免疫检测。
条带分辨率
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶相比 Bio-Rad 预制胶可提供更高分辨率。通过高出 10% 的分辨距离，优化的凝胶化学和梯度格式，您可以在Bolt 预制胶上看到更多的蛋白条带。在实验分析中，您可以看到胰岛素 B 链和胰岛素 A 链的两个单独的条带，它们具有相似的分子量。Bolt 预制胶上的蛋白质条带看起来很直，甚至整个条带上的信号强度都很均匀，而 Bio-Rad 预制胶上的蛋白质条带不均匀且质量很差。
Bolt Bis-Tris 预制胶条带分辨率—Bio-Rad 染色蛋白预制胶的比较。(A) 使用 Invitrogen SimplyBlue SafeStain 染色 Bolt Bis-Tris 梯度预制胶。(B) 使用竞争对手的染色剂染色 Bio-Rad 的 tris-甘氨酸梯度预制胶。(C) 放大两种预制胶的泳道 5 截面，显示胰岛素 B 链（3.5 kDa）和胰岛素 A 链（2.5 kDa）。
资源
仅供科研使用，不可用于诊断目的。