逆转录 - 聚合酶链反应 (RT-PCR) 是一种通过逆转录酶将 RNA 转化为 cDNA,然后使用 DNA 聚合酶进行复制的过程。为了从逆转录获得良好的结果,起始 RNA 材料必须数量充足、完整且无基因组 DNA

实时 PCR 也称为定量 PCR 或 qPCR,其可对 PCR 模板(如 DNA 或互补 DNA [cDNA])的拷贝数进行定量。用于 qPCR RNA 提取的 Invitrogen 试剂盒和试剂设计用于产生 RT-PCR 反应所需的 RNA 质量和数量

了解 RNA 分离所涉及的步骤

选择指南:适用于 RT-PCR 和 qPCR 的 RNA 提取试剂盒

 高纯度、完整 RNA 的金标准在20分钟内获得高质量 RNARNA 和 DNA 的高通量纯化完整、无需纯化的系统,适合 qRT-PCR 结果
支持的 PCR 类型逆转录 PCR 及下游应用逆转录 PCR 及下游应用逆转录 PCR 及下游应用直接 qPCR
试剂/试剂盒TRIzol 试剂PureLink 试剂盒MagMAX 试剂盒Cells-to-CT 试剂盒
优势被引用次数非常多,经济实惠快速且便捷可扩展且灵活简洁,qRT-PCR 的理想之选
分离方法有机试剂硅胶膜,色谱柱或孔板形式磁珠(可扩展性、灵活性)化学裂解
是否兼容高通量
是否包含 RT 试剂
是否包含 qPCR 试剂
制备时间~1小时<20分钟~45分钟10分钟
兼容的样本类型大多数样本类型,包括难以裂解的样本细胞和组织细胞、血液、植物、组织细胞
起始材料用量100 mg 组织或107个细胞(需要 1 mL 试剂)多达 200 mg 组织或 5 x 106 至 1 x 108 个细胞多达 100 mg 组织或多达 5 x 106 个细胞1–103 个细胞

 

在 qPCR 前纯化 RNA 样本:DNA 去除

RNA 样本应在 qPCR 前纯化。基因组 DNA 污染可导致假阳性 RT-PCR 结果。赛默飞世尔科技提供多种可用于去除 RNA 制备中可能存在的基因组 DNA 的 DNase

无 DNA 的 DNase 处理和去除试剂盒包含从 RNA 样本中去除污染 DNA 以及去除 DNase 所需的所有试剂,无需使用蛋白酶 K 处理和有机提取。

TURBO DNase 酶试剂盒包括一种由野生型牛 DNase 基因工程改造而来的高活性酶。TURBO DNase 酶结合超低浓度 DNA 的精准度意味着该酶在去除痕量 DNA 污染时特别有效。

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仅供科研使用,不可用于诊断目的。