用于成像分析的染色质缩合和TUNEL试剂盒

在程序性细胞死亡或凋亡的后期，DNA变得高度断裂。这种断裂提供了一个机会，利用末端脱氧核苷酸转移酶催化的dUTP末端标记(TUNEL)反应，将修饰的dUTP连接到受损DNA的3 ' -OH端。然后，可以使用一系列不同的检测策略来检测修饰的dUTP，如BrdUTP或EdUTP。BrdUTP抗体已用于间接检测，而通过偶联生物素或荧光修饰的核苷酸（即生物素-dUTP或荧光素-dUTP）可实现直接检测。“Click点击化学”反应是目前较新且能提高检测灵活性的修饰方法。TUNEL检测已成为广泛使用的原位检测细胞凋亡的方法。

Click-iT TUNEL成像检测试剂盒

传统上，TUNEL试剂盒使用BrdUTP结合DNA，随后通过各种方法进行检测。Thermo Fisher Scientific开发了经改进的TUNEL试剂盒，它使用TdT在断裂DNA的3’-OH末端引入了炔烃修饰的dUTP、EdUTP（图1）。在Invitrogen Click-iT TUNEL检测中，使用Click点击化学方法检测这个合并的核苷酸，点击化学是一种基于铜催化的叠氮化物-炔烃环加成的反应，其高度特异性源于在生物分子、细胞、组织或模型生物中没有类似的叠氮化物和炔烃反应。可以通过荧光或比色的方法来检测合并的EdUTP。

Click-iT TUNEL成像检测试剂盒的基本步骤如图2所示。处理样品后，通过固定和渗透细胞或组织来保存晚期凋亡细胞，从而降低由于细胞分离和后续操作损失而导致的假阴性。然后通过TdT将EdUTP核苷酸快速合并到断裂DNA中。下一步是偶联染料或生物素叠氮化物，然后添加复染剂。与一步法掺入染料或生物素修饰的核苷酸相比，对于Click-iT TUNEL成像试剂盒，两步法可在两小时或更短时间内的相同条件下检测到更高比例的凋亡细胞（图3）。

Click-iT Plus TUNEL成像检测试剂盒

最初的Click-iT TUNEL成像试剂盒依赖于铜的使用，并且我们发现生物分子对铜浓度表现出不同的敏感性。例如，用于催化链接化学反应的高铜浓度会影响荧光蛋白(如GFP)与其他试剂兼容的能力，因为荧光蛋白的荧光会淬灭或使用肌动蛋白特异性化合物鬼笔环肽时表现出结合能力下降。为了克服这些挑战，我们开发了Click-iT Plus TUNEL试剂盒，经优化的铜浓度使荧光蛋白的信号更稳定且提高与鬼笔环肽结合的兼容性，同时促进检测反应。

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用于荧光检测的Click-iT Plus TUNEL试剂

原位凋亡检测的Invitrogen Click-iT Plus TUNEL检测试剂盒可适用于组织切片和粘附细胞。荧光检测试剂盒与GFP或其他荧光蛋白兼容，并可与鬼笔环肽兼容，如图4所示。Click-iT Plus TUNEL试剂盒具有明亮稳定的荧光信号，可与Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594或Alexa Fluor 647叠氮化物一起使用。

参见选择指南

用于比色检测的Click-iT TUNEL试剂盒

Invitrogen Click-iT TUNEL比色法IHC检测试剂盒已经过优化，通过使用生物素叠氮化物和链霉亲和素-过氧化物酶偶联来识别组织中的凋亡细胞，尽管也可以用于粘附细胞。在将EdUTP掺入DNA片段位点后（图5），用生物素叠氮化物标记EdUTP。随后添加链霉素亲和素-过氧化物酶和DAB（过氧化物酶底物），会产生深棕色信号，可通过光学显微镜检测并储存数据。该检测也可与其他比色组织染料共同使用（图6）。

参见选择指南

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Invitrogen Click-iT TUNEL Alexa Fluor成像检测试剂盒适用于HSC和成像分析培养的细胞。小量特异性标记基使实验方案变得快速而有效。这个试剂盒用时在2小时内，能高效鉴别细胞群凋亡的细胞。通过选择荧光标记，Click-iT TUNEL检测试剂盒能与表面和细胞内标志物检测同时使用。然而，对于细胞骨架的检测，我们建议您使用一抗来代替鬼笔环肽（图7）。我们也不建议与荧光蛋白联用。我们已经把该试剂盒和各种凋亡诱导试剂（包括星形孢菌素）用HeLa、A549和CHO K1细胞中进行了测试，同时通过抗体检测凋亡标志物（如裂解的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）、剪切的半胱天冬酶-3、磷酸化组氨酸2B）进行了多重检测。它也被证明可以有效地检测人MCF-7乳腺癌细胞中siRNA敲低DEC2转录因子而引起的凋亡(1)。

DNA染料为区分凋亡细胞中的缩合提供了最快、最方便的途径。细胞核染色适用于活细胞或固定细胞，我们提供广泛的波长，更好的与其他标记产品共同使用。ReadyProbes试剂在室温下稳定，并为方便即用滴管瓶形式的DNA染料。

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• TUNEL试剂盒检测组织中的原位凋亡
• TUNEL比色法试剂盒用于 IHC 揭示细胞增殖和凋亡。
• 高内涵筛选。多参数分析的检测。

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• Liu Y1, Sato F, Kawamoto T et al.(2010) Genes Cells 15:315-25.