Digital PCR

La PCR digital es un nuevo enfoque para la detección y cuantificación de ácidos nucleicos que ofrece un método alternativo a la PCR cuantitativa en tiempo real convencional, haciendo foco en cuantificación absoluta y detección de alelos raros. La PCR digital funciona mediante la división de una muestra de ADN o ADNc en muchas reacciones de PCR individuales en paralelo; algunas de estas reacciones contendrán la moléculatarget (positivo), mientras que otras no (negativo). Una sola molécula puede amplificarse un millón de veces o más; durante la amplificación se utiliza la química TaqMan® con sondas específicas marcadas con diferentes fluoróforos. En aquellos casos en los que no haya ninguna molécula target presente, no se generará ninguna señal. Tras el análisis de PCR, la fracción de reacciones negativas se usa para generar un recuento absoluto del número de moléculas de la muestra, sin necesidad de estándares ni controles endógenos.

El uso de un chip nanofluídico proporciona un mecanismo cómodo y sencillo para ejecutar miles de reacciones de PCR en paralelo. Cada uno de los pocillos está cargado con muestra, mezcla maestra y reactivos de ensayo TaqMan®, y se analiza individualmente para detectar la presencia (positivo) o ausencia (negativo) de una señal de amplificación. Para representar los pocillos que pueden haber recibido más de una molécula de la secuencia objetivo, se aplica un factor de corrección mediante el modelo de Poisson.  

Both digital PCR (dPCR) and real-time PCR (qPCR) can be used to detect and quantify nucleic acids. While these technologies share similarities, key differences in quantification methods confer each tool with application-dependent benefits or limitations.

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Not all dPCR is created equal. Our microfluidic array plate (MAP) technology offers significant benefits over droplet digital PCR (ddPCR) technologies, including:

• Superior consistency and accuracy
• Reduced dead volume (<5%)
• Simpler worklow
• Faster time to answer

See the benefits of MAP technology ›

Getting started with the QuantStudio Absolute Q dPCR System is simple. It takes under five minutes to prepare a MAP16 dPCR plate and about two hours or less to get your results.

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• No es necesario depender de referencias o estándares.
• Capacidad para aumentar la precisión mediante más repeticiones de PCR.
• Alta tolerancia a los inhibidores.
• Capacidad para analizar mezclas complejas.
• Detección lineal de pequeños cambios de plegado.

Cuantificación absoluta, utilizando la tecnología de chip sellado, para obtener un método confiable y datos sensibles y precisos

Encuentre los reactivos y consumibles que necesita para la cuantificación absoluta mediante PCR digital.

Los instrumentos y reactivos de PCR digital mejoran el rendimiento de los ensayos TaqMan® actuales, lo que permite a las aplicaciones beneficiarse de mayores sensibilidad, precisión y cuantificación absoluta.

Detecte y cuantifique pequeñas diferencias porcentuales en el número de copia con un alto grado de precisión

Cuantificación absoluta de bibliotecas de NGS y validación de los resultados de secuenciación, sin patrones de referencia.

Detecte y cuantifique mutaciones raras de targets de baja prevalencia en muestras de investigación en oncología.

Detecte cambios de expresión génica de ± 10 % sin un gen de referencia

Cuantificación absoluta de cargas bacterianas y virales, y recuentos absolutos del patógeno.

Detecte patógenos de bajo nivel que causan enfermedades humanas a través del suministro de agua y alimentos contaminados

Genere estándares de referencia absoluta para mediciones genéticas, metrología y comparaciones entre laboratorios.

Permite la detección y la cuantificación absoluta con sensibilidad de mutaciones de plantas y organismos modificados genéticamente.