磷酸化状态异常与癌症等许多人类疾病有关。研究关键蛋白质靶标的磷酸化和翻译后修饰对于更好地理解疾病背后的机制至关重要。
我们提供磷酸化特异性 ELISA 试剂盒，用于检测许多与多种疾病相关的关键靶标和信号通路（包括 STAT3、CREB、PRAS40、p38、AMPKα、PTK2 和胱天蛋白酶 3 信号传送）的磷酸化状态。这些试剂盒有两种不同的形式——标准 ELISA 和 InstantOne ELISA 试剂盒。这两种试剂盒都有助于确保出色的检测结果和重现性。试剂盒必须满足灵敏度、动态范围、精度、特异性、回收率和批间一致性的质量控制规范。
这些磷酸化 ELISA 试剂盒使用标准 ELISA 形式，包括预包被捕获抗体，然后逐步添加样品、检测抗体和其他试剂。试剂盒配有标准蛋白质，可生成定量结果的标准曲线。
磷酸化 ELISA 试剂盒的一般方案如下。捕获抗体预包被于 96 孔板底部。将提取物或标准品加入板孔中温育，以便目标蛋白结合。然后洗涤孔以去除未结合的物质，加入检测抗体并孵育使之在目标蛋白周围形成夹心式结合。然后加入 HRP 抗兔抗体并孵育，允许其与兔源检测抗体结合。下一步，加入HRP的发光底物，随之而来的酶反应使溶液变蓝。最后，终止反应，因样品中目标蛋白的含量的不同，溶液会呈现出不同程度的黄色。用酶标仪在450nm下读取吸光度。
本视频演示了如何使用磷酸化 ERK 1 和 2 的预包被 ELISA试剂盒。
本视频展示了如何使用磷酸化 p38 的预包被 ELISA试剂盒。
在 InstantOne 检测方案中，靶标分析物与溶液中的两种夹心 ELISA 抗体结合，而捕获通过专有机制与板结合的抗体，因此样本和检测试剂可以同时加入 InstantOne ELISA 检测板。将未结合的检测试剂和非特异性样本成分洗掉（如同在传统 ELISA 中一样），而特异性分析物通过比色法来检测。
InstantOne ELISA 检测使用传统 ELISA 规格，但有一个主要区别。由于捕获抗体通过专有机制结合到板上，InstantOne 允许靶标分析物结合到溶液中的两种夹心 ELISA 抗体上，从而简化了使用，减少了动手时间和检测时间。这使得样品和检测试剂可以同时添加到 InstantOne ELISA 检测板中。将未结合的检测试剂和非特异性样本成分洗掉（如同在传统ELISA 中一样），而特异性分析物通过比色法来检测。整个过程只需要一个多小时就能完成。
除了1 小时/1 次冲洗的 InstantOne ELISA 提供的便利外，还增加了一层传统夹心 ELISA 不容易达到的灵活性。由于抗体没有预包被在孔中，几个不同的靶标可以在不同孔中的同一板上同时分析。只需将样品裂解物添加到板孔中，并将不同抗体试剂混合物添加到不同的孔中。跨家族成员或同一个板中向下途径的总靶标和磷酸化靶标的分析从未如此简单。
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